脯氨酰寡肽酶在小鼠卵巢黄体中的作用研究

摘要

目的： 脯氨酰寡肽酶(POP)是一种特异性水解多肽链中脯氨酸残基羧基端肽键的丝氨酸蛋白酶，研究报道POP高表达于小鼠卵巢，但其在卵巢中的功能尚不清楚。本研究将探讨POP在小鼠卵巢黄体的表达和在黄体中的作用及其机制。 方法： 通过免疫组化和Western-blot检测POP在卵巢中的分布；分离原代黄体细胞进行体外培养，通过转染POP过表达质粒和POP抑制剂KYP-2047((2S)-1(((2S)-1-(1-Oxo-4-phenylbutyl)-2-pyrrolidinyl)carbonyl)-2-pyrrolidinecarboni trile)处理，通过CCK8检测POP对黄体细胞增殖的影响；通过放射免疫法检测孕酮和雌二醇表达水平的变化；通过荧光定量PCR和Western-blot检测POP对激素合成关键酶表达的影响和可能的信号通路。 结果： 免疫组化显示POP高表达于小鼠卵巢黄体细胞；POP过表达或 KYP-2047处理对黄体细胞活力没有明显影响；POP过表达促进了孕酮分泌，但对雌二醇没有明显影响，KYP-2047处理后孕酮和雌二醇的分泌量下降；进一步研究发现POP影响了黄体细胞类固醇合成关键酶的表达，包括CYP11A1、3β-HSD和StAR。SF1是调节黄体细胞激素合成的关键转录因子，POP过表达后SF1的表达水平上升，KYP-2047处理后SF1的表达水平下降。 结论： 1、POP高表达于小鼠卵巢黄体细胞； 2、POP促进了小鼠黄体细胞孕激素的合成; 3、POP通过刺激黄体细胞CYP11A1、3β-HSD和StAR的表达调节孕酮的分泌；SF1参与此过程。

目录

声明

中英文缩略词表

第1章 引言

第2章 材料和方法

2.1实验材料

2.1.1 实验动物

2.1.2实验仪器设备

2.1.3 主要实验试剂

2.1.4 主要实验试剂配制

2.2实验方法

2.2.1动物处理

2.2.2 免疫组化

2.2.3小鼠原代黄体细胞分离培养

2.2.4质粒转染及添加抑制剂

2.2.5细胞活力检测

2.2.6激素检测

2.2.7实时荧光定量PCR

2.2.8蛋白印迹（Western Blot）

2.2.9数据统计分析

第3章 实验结果

3.1 POP在小鼠黄体高表达

3.2 POP对黄体细胞活力无影响

3.3 POP调节黄体细胞孕酮分泌

3.4 POP调节CYP11A, 3β-HSD 和StAR的表达

3.5 POP影响了黄体细胞SF1表达

第4章 讨论

第5章 结论与展望

5.1 结论

5.2 展望

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述: 卵巢颗粒细胞与黄体化颗粒细胞的研究进展