声明
中英文缩略词语
前言
1.概述
2 锚蛋白家族的分类、结构和功能
3 锚蛋白-B与窦房结疾病及心房颤动
4 锚蛋白-B与锚蛋白-B综合征
5 锚蛋白-B与获得性心律失常
6 研究设想
第一部分构建携带ANK2 p.Q1283H变异的KI鼠进行在体功能分析
材料与方法
1. 实验动物
2. 实验细胞
3. 主要仪器设备
4. 主要实验试剂
5. 主要试剂配制
实验方法
1. 构建及繁殖KI小鼠模型
2. DSI植入式生理信号遥测系统监测心电图
3. 心脏超声心动图检测
4. 免疫组织化学染色
5. 透射性电子显微镜
6. 心肌细胞分离与培养
7. 细胞免疫荧光
8. 心肌细胞T管染色
9. 心脏组织蛋白和RNA提取
10. BCA蛋白浓度测定
11. SDS-PAGE电泳与转膜
12.蛋白免疫印迹（Western bolts）
13. 实时荧光定量PCR
14. 分析型凝胶过滤液相色谱
15. 等温恒定热滴定技术
16. 统计学分析
实验结果
1 基础状态下KI鼠的心电图变化及心律失常发生情况
2 应激状态下KI鼠的心电图变化及心律失常发生情况
3 比较WT和KI鼠的心脏形态特征和血电解质水平
4 比较WT和KI鼠心脏组织中锚蛋白-B的表达情况
5 体外检测p.Q1283H对锚蛋白-B与β-血影蛋白结合的影响
讨论
结论
第二部分ANK2 p.Q1283H致心律失常的电生理和分子机制探讨
材料与方法
1. 实验动物
2. 实验细胞
3. 主要仪器设备
4. 主要实验试剂
5. 主要试剂配制
实验方法
1. 心肌细胞分离与培养
2. 全细胞膜片钳记录
3. 心肌细胞钙瞬变检测
4. 心肌细胞钙火花检测
5. 细胞免疫荧光
6. 心脏组织蛋白提取
7. SDS-PAGE电泳与转膜
8. 蛋白免疫印迹
9. 免疫共沉淀
10. HEK293T细胞培养、转染及蛋白提取
11. 蛋白表达及纯化
12. 纯化蛋白脱盐
13. GST-pull down分析
14. 考马斯亮蓝染色
15. BIAcore技术
16. 统计学分析
实验结果
1 比较WT和KI心肌细胞后除极活动的发生情况
2 比较WT和KI心肌细胞自发性钙瞬变事件的发生情况
3 比较WT和KI心肌细胞钙火花的发生频率及时空参数
4 比较WT和KI心肌细胞电刺激或咖啡因诱导的钙瞬变参数
5 比较WT和KI心脏几种常见的钙调控蛋白表达水平
6 比较WT和KI心脏Cav1.2、PLN和RyR2的磷酸化水平
7比较WT和KI心脏PKA和CaMK II激酶的表达及活性
8 比较WT和KI心脏PP1和PP2A磷酸酶的表达及活性
9 比较WT和KI心脏PP2Ac翻译后修饰及调节亚基的表达
10 比较WT和KI心脏AnkB与B56α的结合情况
11 体外检测p.Q1283H对AnkB与B56α结合的影响
讨论
结论
第三部分 采用KI鼠室性心律失常模型筛选有效的治疗药物
材料与方法
1. 实验动物
2. 实验细胞
3. 主要仪器设备
4. 主要实验试剂
5. 主要试剂配制
实验方法
1. DSI植入式生理信号遥测系统监测心电图
2. 心脏超声心动图检测
3. 心肌细胞分离与培养
4. 心肌细胞钙瞬变检测
5. 统计学分析
实验结果
1 美托洛尔抑制KI鼠的应激后室性心律失常
2 氟卡尼抑制KI鼠的应激后室性心律失常
讨论
结论
全文总结
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综 述一:心脏性猝死的遗传学基础
综 述二:蛋白磷酸酶2A在心脏疾病中的作用研究进展
