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PNA-TPP靶向调节谷胱甘肽抗氧化系统增强肺腺癌干细胞化疗敏感机制研究

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中英文缩略词表

第1章 前言

第 2 章 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 实验细胞来源

2.1.2质粒与菌株

2.1.3 主要试剂及来源

2.1.4 主要仪器和设备

2.1.5 主要试剂及液体配制

2.2 实验方法

2.2.1 细胞的培养

2.2.2 PNA-TPP复合物的合成与转染

2.2.3 siRNA转染A549干细胞球

2.2.4 过表达质粒载体构建并转染

2.2.5 检测还原型谷胱甘肽含量

2.2.6 检测总谷胱甘肽与氧化性谷胱甘肽含量

2.2.7 化学发光仪测定ATP浓度

2.2.8 化学发光仪测定ROS水平

2.2.9 RT-PCR检测mRNA 的表达水平

2.2.10 Western blot检测目的蛋白表达水平

2.2.11 CCK8试剂盒检测细胞增殖抑制率

2.2.12 FCM检测细胞凋亡率

2.3 统计方法

第 3 章 结果

3.1 细胞培养的形态观察

3.2 不同浓度顺铂的作用及凋亡蛋白变化

(1)顺铂作用 A549 细胞及 A549 干细胞球 24h 增殖抑制率结果对比

(2)顺铂作用 A549 细胞及 A549 干细胞球 24h 的半数抑制浓度( IC50 )结果对比

(3)不同浓度的顺铂作用 A549 干细胞球,凋亡相关蛋白的表达

3.3 A549细胞及A549干细胞球内谷胱甘肽相关氧化应激、抗氧化、能量代谢物质及凋亡相关蛋白表达的差异

3.3.2 Western Blot及RT-PCR分别检测A549及A549干细胞球组GCLC、GCLM 、GSS、 xCT蛋白及mRNA 表达水平

3.3.3Western Blot检测A549及A549干细胞球凋亡相关蛋白Capase3、Bax、Bcl-2蛋白水平

3.4 PNA-TPP转染A549及A549干细胞球后谷胱甘肽合成相关蛋白的表达检测

3.5 PNA-TPP联合顺铂对A549干细胞球凋亡、谷胱甘肽、ROS及ATP的影响

3.5.1 Western Blot及流式细胞仪检测PNA-TPP联合顺铂对A549干细胞球凋亡的影响

3.5.2 试剂盒检测PNA-TPP联合顺铂对A549干细胞球GSH、ATP、ROS含量的影响

3.6 siRNA及过表达质粒载体转染A549干细胞球后对其蛋白表达、GSH水平的影响

3.6.2 siRNA干扰及过表达质粒载体转染A549干细胞球后联合PNA-TPP对其蛋白表达的影响

3.6.3 siRNA及过表达质粒载体转染 A549 干细胞球后对GSH水平的影响

第4章 讨论

第 5 章 结论与展望

5.1 结论

5.2 展望

致谢

参考文献

攻读学位期间研究成果

综述:xCT与肿瘤及肿瘤干细胞的研究进展

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