两种含SV40T不同区段的基因构建及其转基因小鼠的建立

摘要

该试验为了细致研究SV40T致瘤过程中Rb、p53基因的具体作用,构建了两种含有SV40T不同区段的外源基因:Rb结合域点突变的SV40T基因(SV40T-DRb)和无p53结合域的SV40T基因(SV40T-Dp53).建立这两种基因的转基因小鼠,为探讨SV40T致瘤过程中p53和Rb的作用提供工具.试验成果如下:1.利用分子生物学的基因克隆手段,将改造的SV40T基因片段克隆测序.SV40T-DRb基因的测序结果表明,在位于Rb结合域中的第109位氨基酸发生了突变(E→V),其它氨基酸则无变化.SV40-Dp53基因的测序结果表明,与正常基因核苷酸对比的同源性达98％.2.将测序后的SV40T-DRb基因和SV40T-Dp53基因克隆进乳腺特异性表达载体p205C3中,运用雄原核显微注射法制备转基因小鼠.先后共计注射862枚小鼠受精卵,移植360枚注射后存活的小鼠受精卵,使用35只假孕受体母鼠,有23只受孕,共出生127只小鼠.3.转基因小鼠出生后,用PCR方法检测出6只双阳性转基因(同时检测到SV40T-DRb和SV40T-Dp53两种基因)小鼠,为了避免PCR技术造成的假阳性,用Southern blot方法检测出1只双阳性转基因小鼠(♂).4.F<,0>代转基因小鼠繁殖交配后,获得25只F<,1>代小鼠,经PCR检测证明转基因携带率为50％(16/25),符合孟德尔遗传规律,证明外源基因可稳定地传至后代.试验结果证明该试验构建的两种转SV40T不同区段的策略是成功的,其建立的阳性转基因小鼠模型将为该实验室具体研究SV40T致瘤过程中Rb、p53基因的作用提供有用的工具.

目录

文摘

英文文摘

符号说明

文献综述

第一部分 两种含SV40T不同区段的基因构建

1.材料

2.方法

3.结果

4.讨论

第二部分 两种转SV40T不同区段的转基因小鼠的建立

1.材料和方法

2.结果

3.讨论

参考文献

致谢

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