两种含SV40T不同区段的基因构建及其转基因小鼠的建立

摘要

目的为解决SV40T转基因小鼠高发瘤难保种的问题,构建了两种含有SV40T不同区段的外源基因: Rb结合域点突变的SV40T基因(SV40T-DRb)和无p53结合域的SV40T基因(SV40T-Dp53).方法利用分子生物学的基因克隆手段,将改造的SV40T基因片段克隆测序,最终将这两个改造后的基因克隆进乳腺特异性的真核表达载体p205C3中,运用雄原核显微注射法制备转基因小鼠.结果利用PCR方法检测出6只双阳性转基因(同时检测到SV40T-DRb和SV40T-Dp53两种基因)小鼠,为避免检测结果中假阳性的发生,应用Southern-blot方法检测出1只双阳性转基因小鼠.结论本试验的结果证明,构建的两种含SV40T不同区段的策略是成功的,其建立的阳性转基因小鼠确实是弱化了SV40T转基因小鼠高发瘤的特性.