禽源大肠杆菌链霉素耐药质粒的分离与鉴定及其耐药基因的流行病学研究

摘要

本研究通过19种常用药物的药敏实验，发现本实验室分离保存的216株禽源大肠杆菌对链霉素的耐药率为75％。提取部分链霉素高度耐药菌株的质粒，发现菌株AE6、AA7、AE9、BA4、BE、AE2具有相似的质粒图谱且均含有一大小在23Kb大小质粒。其中BE菌株除对磷霉素和利福平敏感外，对其余药物全部耐药。且BE菌株只携带有2种质粒，除23Kb大小质粒外，另一种质粒小于2Kb。将BE株这两种质粒DNA转化DH-5α，链霉素药物平板筛选获得一链霉素抗性转化株。提取转化株质粒，以BE株的质粒溶液作参照跑电泳，发现BE株的大质粒成功转入此转化株中。转化株的药敏实验发现此质粒确实编码了链霉素的耐药特性，这些结果证明23kb的质粒与细菌链霉素耐药基因有关。 根据GenBank发表的大肠杆菌链霉素耐药基因aadA1、strA及strB的序列分别设计引物，应用PCR实验技术对实验室保存的216株禽源大肠杆菌三种链霉素耐药基因进行检测，结果表明：aadA1、strA和strB的阳性率分别为49.1％，56％和65.7％。这些结果与药敏实验结果基本成正相关，但进一步比较发现，部分具有链霉素耐药基因的菌株对链霉素有敏感性，且检出率为51.8％。将相应基因测序，分析发现，AD5和AC3两菌株所携带strB耐药基因在45位点增加了一段序列GTTTCGC，在突变位点后产生了多个终止密码子，导致strB基因不能编码链霉素磷酸转移酶，证明插入突变导致了耐药菌株转变为敏感株。

目录

符号说明

摘要

文献综述

研究一：禽大肠杆菌链霉素耐药质粒的分离与鉴定

研究二：应用PCR实验技术快速检测江苏省域内禽源大肠杆菌链霉素耐药基因的流行情况

附录表格及附录电泳图

成果小结

参考文献

致 谢