根癌农杆菌介导的Bt和PTA基因转化紫花苜蓿“中苜一号”的初步研究

摘要

紫花苜蓿是栽培利用最广泛的豆科牧草，全球种植面积约3500万hm2。苜蓿的大面积种植，也为苜蓿虫害的发生和流行创造了有利的生态条件，近两年来虫害问题日益突出，己成为制约苜蓿产业化发展的主要因素之一。随着生物技术的发展和广泛应用，利用转基因技术改良苜蓿的性状已成为可行的手段。 实验选取由本研究室通过常规大田育种技术育成的紫花苜蓿品种“中苜一号”作为基因转化受体，首先，以该品种为对象，选用下胚轴和子叶为外植体，进行组织培养系统学研究，寻找具有相对较高分化率的外植体和适用于该品种的基本培养基等条件；其次，对“中苜一号”进行了抗生素(ppt)的敏感性实验，并具体探讨了转化过程中，菌液浓度(OD600)，侵染时间，共培养时间等影响转化效率的环节。摸索出转化最佳条件为：以“中苜一号”子叶作为外植体，UM为基本培养基，以OD600为0.6的菌液侵染10分钟，转到加盖有一层灭菌滤纸的培养基上共培养3天后转到筛选培养基上筛选，筛选培养基附加ppt8mg/l及Carb400mg/l。在此基础上以根癌农杆菌菌株EHA105介导，将双基因Bt和PTA转入到紫花苜蓿品种“中苜一号”，最终获得除草剂草丁膦(ppt)抗性的植株，并进行了初步的PCR及RT-PCR分子生物学检测，待进一步的杂交鉴定及昆虫抗性实验。

目录

摘要

符号说明

第一章文献综述

第二章“中苜一号”高频再生系统的建立

第三章根癌农杆菌介导转化过程的优化

第四章根癌农杆菌介导双基因Bt和PTA转化紫花苜蓿及转基因苗的分子生物学检测

参考文献

附 图:

致 谢