炭疽杆菌芽胞外壁胶原样蛋白基因的克隆、表达及其单克隆抗体的制备

摘要

炭疽杆菌是人类历史上第一个被发现的病原菌。炭疽杆菌的研究在近几年取得了较大进展，2003年炭疽杆菌的全基因组序列向全世界发布，意味着炭疽杆菌的研究进入了一个新的发展阶段。 炭疽杆菌芽胞外壁胶原样蛋白(BclA)是芽胞外壁发状菌丝的主要结构成分，也是芽胞表面的主要免疫原蛋白。从国内分离到的炭疽杆菌中克隆出BclA基因，并将已测序的BclA氨基酸序列与公布的BclA氨基酸序列进行多态性分析，发现不同炭疽杆菌菌株间BclA氨基酸序列存在规律性差异。 本研究根据已发表的炭疽杆菌菌株BclA基因序列设计引物，用PcR扩增法从实验室分离的炭疽杆菌菌株MY中扩增出1119bp的BclA基因序列，然后将纯化的PCR产物按正确的阅读框架克隆入pGEx-6p-1载体中的谷胱苷肽．G．转移酶(GST)基因下游，用IPTG诱导实现其在大肠杆菌中的表达。SDS-PAGE电泳结果显示，表达的融合蛋白约为68kDa。将原核表达产物的蛋白经切胶免疫BALB/c小鼠，并以经谷胱苷肽活化的Sepharose 4B亲和层析柱纯化后的蛋白作为检测抗原，经过融合、筛选、克隆化获得稳定分泌针对BclA的单克隆抗体细胞系。蛋白转印结果表明此单抗仅与融合蛋白反应，与载体蛋白不反应。

目录

论文说明：符号说明

综述

参考文献

研究一炭疽杆菌BclA基因的克隆与氨基酸序列的分析

1材料

2方法

3结果

4讨论

研究二炭疽杆菌BclA蛋白的原核表达

1材料

2方法

3结果

4讨论

研究三炭疽杆菌BclA蛋白单克隆抗体的制备

1材料

2方法

3结果

4讨论

参考文献

致 谢