防制仔猪大肠杆菌性腹泻四价菌毛蛋白卵黄粉的研制

摘要

初生和断奶仔猪大肠杆菌性腹泻病的主要病原是产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC)。ETEC的致病作用与其具有黏附素性菌毛和产肠毒素密切相关，二者缺一不可。与仔猪腹泻有关的黏附素抗原主要有K88、K99、987P和F41。ETEC致病过程中重要的一个环节是细菌借黏附素性菌毛黏附固定在仔猪小肠绒毛上皮细胞上，进而增殖并产生大量肠毒素引起小肠吸收分泌功能失常而致腹泻。在对该病的传统防制上主要采用大肠杆菌多价苗、抗菌药物或动物高免血清，但是每种方法各有其缺陷。目前，卵黄抗体作为一类可替代抗生素的高效生物防治制剂在治疗和预防新生和断奶仔猪大肠杆菌性腹泻中的作用受到了国内外学者的关注。 本研究分别对28周龄的开产母鸡采用大肠杆菌四价(K88、K99、987P、F41)混合菌毛蛋白苗免疫和菌体免疫，比较两种方法获得结果的差异。结果表明，两种方法均可以获得卵黄抗体，但菌毛免疫获得的效价均高于菌体免疫。其中菌毛免疫的K88的效价比菌体免疫高2个滴度左右，达到2<'9>。在此基础上用菌毛蛋白苗免疫开产母鸡，三免后卵黄抗体效价已经达到较高水平，且高峰期可以维持三个月左右。对所获得的高免卵黄液进行喷雾干燥，结果表明，140℃进气,72℃出气最适合高免卵黄粉的制得，且卵黄粉中IgY活性不变。 为了进一步研究高免卵黄粉的稳定性，本实验采用温度梯度，pH梯度，蛋白酶以及保存时间长短的不同等外部因素检测试验制得的高免卵黄粉中IgY活性的稳定性，结果显示本实验制得的高免卵黄粉稳定性良好，具有耐酸、耐碱、耐蛋白酶、易于保存等特性。 通过ETEC对仔猪小肠上皮细胞的粘附和粘附抑制试验，表明喷雾干燥前后的高效价卵黄抗体均能有效地阻止ETEC对仔猪小肠上皮细胞的粘附。实验中，粘附组单个细胞粘附的K88<'+>菌数平均为23.79个；喷雾干燥前的卵黄抗体处理的K88粘附抑制组单个细胞粘附的K88<'+>ETEC数平均为1.98个，P<0.01；喷雾干燥后的卵黄抗体处理的K88粘附抑制组单个细胞粘附的K88<'+>ETEC数平均为1.23个，P<0.01。此试验充分证实了喷雾干燥后的卵黄粉对防治仔猪腹泻的临床应用价值。为防治仔猪腹泻的复合型蛋黄粉的研究、开发与应用提供了科学依据。

目录

论文说明：符号说明

文献综述

一、仔猪大肠杆菌性腹泻病原及病机理

二、卵黄抗体研究进展

研究内容一、菌毛免疫和全菌免疫两种方法获得卵黄抗体效价的比较

材料和方法

结果与讨论

研究内容二、多价高免卵黄粉生产工艺和稳定性的研究

材料与方法

结果与讨论

研究内容三、多价高免卵黄粉的应用

材料与方法

结果与讨论

结 论

参考文献

致谢