防治鱼类细菌性疾病复合型蛋黄粉的研制

摘要

伴随着渔业的迅猛发展，鱼类细菌性疾病成为鱼类最严重的一大类传染性疾病，造成了巨大的危害和经济损失，防治策略主要有药物防治、免疫防治和抗病育种。与畜禽传染病的防治相比，我国鱼病防治研究明显落后。在理论上，鱼的抗病育种具有一劳永逸的效果，但这是一个漫长的过程，也难以获得对多种疾病具有抗性的品种。既无行之有效的水体环境控制策略和措施，也无效果显著和易于推广的疫苗，因此形成对化学药物和抗菌素的过分依赖，它们的长期、大量和盲目使用，不仅导致病原体耐药性的产生、防治效果日益降低，而且已形成严重的水环境污染和水产品中有害物质的大量残留，严重威胁着人类健康。因此，只有大力开发和合理使用水产专用药物，才能更有效地防治水产动物疾病，保护人类自身的健康和安全。鸡卵黄抗体(IgY)作为一种免疫球蛋白，和血清抗体(IgG)的功能相似，且生产成本较低，易大量生产，不会带来耐药和药物残留等一系列问题，有望开发为一类可替代抗生素的高效生物防治制剂。 本研究对若干鱼类主要病原菌及其致病性进行验证后，对各抗原之间的交叉反应性进行了研究，还比较了IgY的四种提取方法以及酶联免疫吸附试验(EIASA)与微量凝集反应(MA)两种检测方法。结果表明，各菌株之间几乎不能交叉反应，通过比较，IgY的最佳提取方法被确定，并决定采用微量凝集反应作为检测IgY的方法。在此基础上用微量凝集法定期检测由不同免疫程序获得的IgY效价并制定效价曲线，结果显示，有的抗原之间有免疫竞争或抑制现象，用三联苗免疫产蛋鸡四次比较好。 为了研究蛋黄粉的生物学活性，用喷雾干燥法把多免后的高效价蛋黄液制成蛋黄粉，由蛋黄粉IgY的凝集效价以及抑菌试验结果表明，喷雾干燥对IgY的效价和生物学活性基本不造成影响，凝集效价是24的含特异性抗体的卵黄水溶性组分(WSF)做625倍稀释后仍产生50％的相应抑菌效果，可见，蛋黄粉能有效地抑制相应细菌的生长与繁殖；对喷雾干燥工艺进行了非指定性细菌灭活试验，结果显示，该工艺能有效的灭活细菌：动物试验方面，用制备的高价蛋黄粉定期适量地投喂鲫鱼，确定了其安全性、可口性，并能增强鱼的抵抗力和产生一定特异性保护力，凝集效价是26的卵黄粉对1倍和2倍最小致死剂量的相应致病菌可分别产生90％和75％的保护效果，证实了高效价卵黄粉防治鱼类细菌性疾病的临床应用前景。 另外，从各嗜水气单胞菌菌株提取了Aer毒素和ECPase，对他们及其生物学活性进行了验证。然后，设计不同的试验组，并用溶血抑制、溶蛋白抑制试验和微量凝集试验来检测并制备IgY效价曲线，结果显示，不同菌株的Aer毒素和ECPase能分别交叉抑制溶血和溶蛋白反应，可弥补菌株之间几乎不能交叉反应的缺陷，并进一步增强IgY的作用，而且三者之间之间不会相互抑制抗体的产生，都能产生较高水平抗体。为复合强化型全蛋粉的研制与应用奠定了基础。

目录

论文说明:符号说明

声明

文献综述

一、鱼类细菌性疾病防治概况

二、卵黄抗体研究进展

三、嗜水气单胞菌及其致病因子的研究进展

研究内容一:菌株及其致病性的鉴定

材料和方法

结果与讨论

研究内容二:菌株的交叉反应以及不同免疫程序的IgY效价曲线的制作

材料与方法

结果与讨论

研究内容三:WSF以及蛋黄粉生物活性的研究与应用

材料与方法

结果与讨论

研究内容四:主要致病因子的卵抗的制备以及与菌体卵抗的相互影响

材料与方法

结果与讨论

结 论

参考文献:

致 谢