不同毒力新城疫毒株诱导肿瘤细胞凋亡机制差异分析

摘要

溶瘤病毒是一类能特异在肿瘤细胞中复制并最终杀死肿瘤细胞的病毒。尽管新城疫病毒(New Castle Disease virus，NDV)是以禽类为天然宿主的病毒，但其已被多项研究证实是一种安全有效的溶瘤病毒，目前已有多种新城疫毒株用于临床研究。研究表明凋亡可能作为新城疫病毒溶瘤机制之一在溶瘤过程起重要作用，但对不同NDV毒株在溶瘤治疗机制方面研究不够深入。本实验选取NDV-FMW、NDV-BC和NDV-LaSota分别作为强毒、中毒和弱毒的代表毒株，以肺腺癌A549细胞为模型，研究了不同毒株在溶瘤效力、复制能力、凋亡诱导能力及机制等方面的差异。
　　 方法：1.MTT法筛检测不同毒力毒株以不同浓度作用细胞24h、48h、72h后的溶瘤效率。2.Western Blot检测病毒感染肿瘤细胞后凋亡途径相关蛋白PARP、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12及MAPK通路蛋白JNK、p38、ERK等的活化。
　　 结果：本研究结果表明不同毒力毒株在溶瘤效力、复制能力、凋亡诱导能力及机制方面存在差异。 分别以不同MOI(0.1，1，10)病毒感染肺腺癌A549细胞，感染24h、48h、72h时以MTT法检测细胞死亡率，实验结果显示溶瘤效率方面，强毒＞中毒＞弱毒，此外强毒和中毒溶瘤效率随感染时间增加逐渐增强，而弱毒溶瘤效率随感染时间变化不明显，三种病毒溶瘤效率均与病毒使用剂量里正相关。病毒复制能力检测结果表明，强毒与中毒在A549细胞中显著增殖，但未检测到弱毒的增殖。对凋亡通路的研究结果表明，三种病毒分别感染细胞后均能同时活化Caspase8、Caspase9、Caspase3及裂解PARP蛋白，表明外源性及内源性凋亡途径同时参与病毒毒介导的细胞凋亡，而作为内质网应激途径的标志性蛋白，Caspase12的活化情况与对照无明显变化。MAPK通路的主要蛋白磷酸化水平均有所升高，其中P-JNK磷酸化在病毒感染12h时有明显升高，P38磷酸化水平与对照相比显著升高，Erk1/2磷酸化水平除强毒组外与对照相比变化不明显。AKT蛋白丝氨酸磷酸化水平在三种病毒分别感染后均呈下降趋势。实验结果同时也表明，强毒和中毒感染后Caspase活化、p38磷酸化要明显早于弱毒感染组。本实验对NDV强毒、中毒、弱毒在A549细胞上的溶瘤效力和机制差异进行了比较研究，为NDV用于体外溶瘤研究及临床治疗提供了一定的理论基础。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:符号说明

声明

第一章溶瘤新城疫病毒研究综述

1溶瘤病毒简介

2.新城疫病毒

2.1 NDV结构

2.2 NDV溶瘤研究

2.3 NDV溶瘤机制

2.4展望

参考文献

第二章实验材料及方法

材料与方法

1材料

2实验方法

第三章实验结果与讨论

前言

实验结果

一、实验准备

二、MTT实验结果

三、病毒增殖实验

四、免疫印迹实验

讨论

参考文献

致谢