检测传染性支气管炎病毒抗体的血凝抑制试验抗原及IB-ND-IBD-EDS-AI五联灭活疫苗的研制

摘要

传染性支气管炎(IB)是由传染性支气管炎病毒(IBV)引起的急性、高度接触性传染病，给世界范围内养鸡业带来巨大经济损失。本研究制备了血凝抑制(HI)试验抗原，建立了检测IBV抗体的HI试验方法；对分离的IBV流行毒株(LH株)进行了全面鉴定，并研制了IB-新城疫(ND)-传染性法氏囊病(IBD)-减蛋综合症(EDS)-禽流感(AI)五联灭活疫苗。
　　 1检测IBV抗体的HI试验抗原制备
　　 本研究比较了三种浓缩IBV方法(超速离心法、PEG沉淀法和PEG透析法)和三种酶(A型产气荚膜梭菌培养滤液、I型卵磷脂酶C和神经氨酸酶)对制备HI试验抗原的影响。最后确定最佳方法为：将IBV(M41株)接种于10日龄SPF鸡胚，37℃孵化36 h，收获尿囊液经4000 g离心30 min，将上清再次以25000 g离心70min。浓缩的病毒液加入终浓度为3U/mL的PLC1，37℃孵育2 h，制备的HI试验抗原具有较高的特异性，建立的HI试验方法可以用于检测IBV HI抗体。
　　 2 IB-ND-IBD-EDS-AI五联灭活疫苗的研制
　　 本研究对IBV(LH株)种毒进行了鉴定，将毒株在鸡胚中连续传10代，测得P1、P5和P10代的病毒含量都≥106.5 EID50/0.1 mL，说明此毒株稳定。IBV(LH株)种毒无细菌、霉菌、支原体和其他外源病毒污染。使用H120弱毒疫苗做基础免疫，3周后再用本毒株所制灭活疫苗免疫，二免IBV HI抗体效价几何平均值是首免HI抗体效价几何平均值的3倍以上，IBV(LH株)具有良好的免疫原性。
　　 用NDV(LaSota株)，IBV(LH株)，IBDV(NF8株)，EDSV(AV127株)和H9亚型AIV(F株)接种SPF鸡胚或非免疫鸭胚，收获病毒液，经0.1％甲醛灭活后制得抗原，按照一定生产工艺方法乳化，制成IB-ND-IBD-EDS-AI五联灭活疫苗。
　　 用五联灭活疫苗免疫鸡只，免疫3周后NDV HI抗体效价几何平均值达到6.5log2，IBV HI抗体效价几何平均值达到7.1 log2，IBDV抗体效价几何平均值达到583(大于等于391为阳性)。免疫4周后，免疫鸡只的H9亚型AIV HI抗体效价几何平均值达到7.5log2，EDSV HI抗体几何平均值可以达到8.8 log2。攻毒后，免疫鸡可以抵抗IBV(LH株)、ND(F48E8株)和H9亚型AIV(F株)攻击，获得完全保护。五联灭活疫苗对IB、ND、IBD、EDS和H9亚型AI的免疫保护期至少12周。