不同来源金黄色葡萄球菌的肠毒素基因分布与SCCmec，spa及MLST分型研究

摘要

本研究收集了496株金黄色葡萄球菌（S.aureus），菌株来源涉及人源、器械源、动物源和食品源。根据文献报道的18种S.aureus肠毒素基因(sea～see，seg～sei, ser)及类肠毒素基因（selj～selq，selu）设计引物，建立了多重PCR检测方法并利用该方法检测了496个S.aureus菌株中肠毒素基因及类肠毒素基因的分布。其中，34.27％的菌株携带经典型肠毒素基因(sea～see)，27.02％的菌株携带新型肠毒素基因（seg～sei, ser）及42.94％的菌株携带类肠毒素基因（selj～selq，selu）。检测率最高的肠毒素基因分别为sea(19.76％),seg(19.15％),selo(19.15％),selm(16.94％),seln(16.33％)及sei(15.92％)。同时发现了两个新的肠毒素基因簇，即基因簇（seg-selo-selm-seln-sei）与基因簇（seg-selo-selm-seln-sei-selu）。另外，一些肠毒素及类肠毒素基因常出现在同一菌株中，例如:ser，sed，selj;sea，selk，selq; selk，selq。携带seh基因的金黄色葡萄球菌均为MSSA菌株。在本研究中，新型肠毒素及类肠毒素基因在不同来源的金黄色葡萄球菌中的出现率很高，由此可见，金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测不能局限于5种经典型肠毒素基因，新型肠毒素基因及类肠毒素基因应引起重视。
　　本研究对192株金黄色葡萄球菌通过spa及MLST分型技术进行分型，并对66株MRSA进行SCCmec分型，共发现45种ST型，59种spa型及5种SCCmec型。人源MRSA主要为CC239-t030-SCCmecⅢ、CC239-t037-SCCmecⅢ、ST630-t4549-SCCmecⅤ与ST630-t2196-SCCmecⅤ型;器械源MRSA几乎均为ST630-t4549-SCCmecⅤ型;牛源MRSA均为ST630-t2196-SCCmecⅤ型;猪源MRSA均分布于CC9，而未能进行SCCmec分型的猪源MRSA均为ST9-t899与ST2630-t1939型。Sea-selk-selq、selk-selq及sea-selq在CC239-SCCmecⅢ型MRSA菌株中有着广泛分布，CC9的MRSA菌株中有selk-selq的分布，而sea-selk-selq在CC5的MSSA菌株中同样存在。Seg-sei-selm-seln-selo在CC5-SCCmecⅡ型MRSA及seg-sei-selm-seln-selo-selu在CC1301-SCCmecⅤ型MRSA中均有分布，而这两种基因簇更多的分布于CC5、CC25、CC30、CC45及CC1301的MSSA菌株中。研究表明某些肠毒素基因尤其是肠毒素基因簇存在于一些特殊基因型的菌株中，而且可能和MRSA有着关联。

目录

摘要

符号说明

综述 金黄色葡萄球菌肠毒素及分子分型研究进展

1．金黄色葡萄球菌肠毒素

1．1 金黄色葡萄球菌食物中毒

1．2 肠毒素基因的位置

2．金黄色葡萄球菌的分子分型

2．1 SCCmec分型

2．2 SPA基因分型

2．3 MLST分型

2．4 eBURST

3．MRSA的流行现状

4．金黄色葡萄球菌肠毒素基因及其所产毒素造成的公共卫生威胁

第一章 不同来源金黄色葡萄球菌的肠毒素基因分布

1 材料和方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果

2．1 引物的特异性

2．2 多重PCR扩增结果

2．3 不同来源金黄色葡萄球菌肠毒素及类肠毒素基因的分布

3 讨论

第二章 金黄色葡萄球菌的分子分型研究

1．材料

1．1 菌株

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器

2 方法

2．1 基因组提取

2．2 MRSA的PCR鉴定

2．3 MRSA的SCCmec分型

2．4 金黄色葡萄球菌的spa分型

2．5 MLST分型

3．结果

3．1 不同来源金黄色葡萄球菌MRSA的检测情况

3．2 MRSA菌株的SCCmec分型

3．3 spa基因分型

3．4 MLST分型

3．5 SCCmec、spa及ST型之间的相关性

3．6 金黄色葡萄球菌肠毒素基因谱与分子分型之间的相关性

3．7 MRSA菌株的系统发育分析

4．讨论

4．1 MRSA的分布

4．2 不同来源菌株的SCCmec、spa及ST型与肠毒素基因谱的相关性

参考文献

致谢

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