猪胎盘肽冻干粉的制备及功效考察

摘要

猪胎盘(Pig Placenta)是富含多种生物活性成分的优质动物药资源，具有调节内分泌、增强免疫力、防治阿尔兹海默症、抗氧化、增强记忆力等功效，但目前常被废弃，有关猪胎盘的研究鲜见报道。本实验以猪胎盘为原料，利用组织匀浆、反复冻融相结合的方法提取猪胎盘肽，优化猪胎盘肽冻干粉制备工艺及功效评价，旨在为猪胎盘肽的充分合理利用提供科学依据。具体研究内容如下:
　　1.猪胎盘肽的提取和分析
　　利用组织匀浆、反复冻融相结合的方法提取猪胎盘成分，并鉴别其基本性质，采用SDS-PAGE电泳方法鉴别猪胎盘肽，建立RP-HPLC色谱条件分析猪胎盘提取物。实验结果为猪胎盘提取液为微黄色透明液体，其pH为6.70;电泳结果:猪胎盘提取液含有相对分子量为74.4 kDa，61.16 kDa，43.39 kDa，14.52 kDa分子肽;提取液多肽含量为6.050mg.ml-1;在200～600 nm范围内在260.5 nm处有最大吸收峰。RP-HPLC色谱条件:色谱柱:SymmetryC18(5μm，4.6×250 mm);流动相:60％乙腈-水，梯度洗脱:乙腈:0～15min10％～20％，15～20 min20％～25％;柱温:25℃;流速:0.5 ml.min-1;检测波长:260.5 nm;进样量:10μl，RP-HPLC分析呈现12个峰，初步认定含有人血白蛋白、免疫球蛋白、免疫调节因子、羊胎盘肽等功效成分。
　　2.猪胎盘肽冻干粉的制备及稳定性考察
　　以外观、复水性、多肽含量为考察指标，通过单因素考察，确定最佳冻干保护剂为4％蔗糖，冻干时间为30 h，药液体积为3 ml。以多肽含量为考察指标，对冻干保护剂浓度、冻干时间、药液体积三种因素进行星点设计-响应面法优化工艺，确定对猪胎盘肽多肽含量影响程度大小顺序为药液体积＞蔗糖浓度＞冻干时间，最佳工艺为4.35％蔗糖、冻干时间为30h、药液体积为3.41 ml，此时多肽含量最大，为6.05016 mg.ml-1。经稳定性实验，猪胎盘肽冻干粉在高温高湿和光照条件下不稳定，所以要密封干燥低温避光保存。
　　3.猪胎盘肽功效考察
　　测定猪胎盘肽冻干粉体外清除DPPH·自由基、超氧阴离子自由基(O2-)、羟基自由基（·OH-）的活性，结果表明猪胎盘肽冻干粉具有清除DPPH·、O2-、·OH-活性，且清除自由基活性与维生素C清除自由基活性相当。
　　猪胎盘肽冻干粉作用于经过D-半乳糖诱导的衰老小鼠，给药后每周末称量小鼠体重;停药前一周采用Morris水迷宫法检测小鼠学习记忆能力。第六周末处死小鼠，以皮肤含水率及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)的含量为考察指标，并观察病理切片。结果表明:与正常组相比，模型组小鼠逃避潜伏期明显延长，小鼠在平台象限内停留时间、停留时间百分比、穿越平台次数均减少(P＜0.05);小鼠体重、皮肤含水率、SOD含量、Hyp含量降低(P＜0.01，P＜0.05)，MDA含量升高(P＜0.01，P＜0.05)，病理检查结果为皮肤表皮不规则，真皮皱缩，胶原纤维排列紊乱;猪胎盘肽经皮给药后，与模型组相比，高、中剂量组小鼠逃避潜伏期缩短(P＜0.05)，高剂量组小鼠在平台象限内停留时间、停留时间百分比、穿越平台次数均增高(P＜0.05);高、中剂量组小鼠体重、皮肤含水率、SOD含量、Hyp含量均明显上升(P＜0.01，P＜0.05)，MDA含量明显下降(P＜0.01，P＜0.05);病理检查结果为猪胎盘肽高、中剂量组小鼠的皮肤结构较完整，表皮规则，真皮厚度增加，胶原纤维排列较整齐。

目录

摘要

英文缩写一览表

第一章 绪论

1 胎盘

1．1 胎盘生物活性成分及功效

1．2 动物胎盘的研究进展

2 胎盘肽

2．1 胎盘肽的制备

2．2 胎盘肽的分离纯化

2．3 胎盘肽的鉴定方法

2．4 胎盘肽的功能

3 本文的研究意义及主要内容

参考文献

第二章 猪胎盘肽的提取及分析

1 材料

1．1 材料与试剂

1．2 主要仪器

1．3 常用溶液的配制

2 方法与结果

2．1 猪胎盘提取液的制备

2．2 猪胎盘提取液的鉴别

2．3 SDS-PAGE电泳实验

2．4 RP-HPLC色谱分析实验

3 讨论与小结

参考文献

第三章 猪胎盘肽冻干粉制备工艺及稳定性考察

1 材料

1．1 材料与试剂

1．2 仪器

2 方法与结果

2．1 猪胎盘肽冷冻干燥工艺流程

2．2 冷冻干燥工艺研究

2．3 最佳工艺验证

2．4 稳定性考察

3 讨论与小结

参考文献

第四章 猪胎盘肽体外抗氧化能力的初步研究

1 材料

1．1 材料与试剂

1．2 主要仪器

2 方法与结果

2．1 测定DPPH·清除活性

2．2 测定O2ˉ清除活性

2．3 测定·OHˉ清除活性

3 讨论与小结

参考文献

第五章 猪胎盘肽体内抗衰老能力的初步研究

1 材料

1．1 实验材料

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器

1．4 常用溶液的配制

2 方法与结果

2．1 动物分组

2．2 造模及给药

2．3 模型评估

2．4 学习记忆能力检测

2．5 取材

2．6 指标检测

2．7 统计学处理

2．8 各组小鼠指标检测结果

3 讨论与小结

参考文献

全文总结

1 实验总结

2 创新点

3 待完善之处

致谢

读研期间发表论文及参与项目情况

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