重水标记法测定日粮赖氨酸摄入量对大鼠血液免疫球蛋白G代谢动力学的影响

摘要

目的:
　　我国目前尚未制定中国人群膳食必需氨基酸推荐摄入量，有关蛋白质、氨基酸代谢动力学研究的方法也很少。本课题组前期实验得出中国健康青年男性膳食赖氨酸的需要量，为进一步验证此结果是否满足该人群的实际生理需要，本论文通过“赖氨酸摄入量对大鼠血浆IgG代谢动力学的影响”这一方面深入探讨。研究赖氨酸摄入量过低或过高，对体内IgG合成率的影响，与正常赖氨酸摄入量相比的差别，为进一步分析本课题组前期的人体赖氨酸需要量研究结果是否真正满足人体生理需要提供依据。
　　方法:
　　通过用重水腹腔注射大鼠来标记样品，90 min后取血并观察血液中IgG是否结合氘。梯度洗脱法确定IgG最佳纯化方案，并SDS-PAGE进行鉴定。酸水解IgG，衍生水解物中丙氨酸，最后GC/MS检测。
　　检测饲料中氨基酸组分，分析大鼠体重和进食量。用在日常饮食状态下，较长时间段内大鼠摄入高剂量(1.6％)、正常剂量(0.9％)、低剂量(0.2％)三种赖氨酸水平的饲料。通过利用2H2O作为示踪剂，腹腔注射生理盐水（2H2O配制）和日常饮水中添加4％的2H2O两种方法，对大鼠体内的蛋白进行同位素氘标记。探究三组不同赖氨酸摄入量对大鼠血液IgG的代谢动力学和IgG的分数合成率的影响，剖析血浆IgG代谢动力学参数对赖氨酸摄入量的敏感程度，为进一步研究对赖氨酸摄入量较敏感的检测参数构建方法体系，从而为确定人体赖氨酸需要量的研究奠基。
　　结果:
　　梯度洗脱法确定IgG纯化最佳方案（缓冲液浓度、pH、流速、时间）并用SDS-PAGE鉴定表明此方案IgG纯化量多、纯度高。GC/MS结果显示，重水可以在大鼠腹腔注射90min时，短时间内完成对血浆IgG水解物中丙氨酸的标记，即重水标记丙氨酸检测方法建立成功。第三章实验表明:三组的大鼠体重和进食量都有显著差异，从大到小依次:高剂量组、正常剂量组、低剂量组;低剂量组的IgG、TP含量与高剂量组比，存在显著性差异(P＜0.05)，高剂量组IgG和TP含量最高，然后依次为正常剂量组，低剂量组;随着赖氨酸摄入量的增加，血浆IgG的分数合成率呈增加趋势;IgG合成动力学方程:高剂量组ft=0.076027×(1-e-02231t)，正常剂量组ft=0.084139×(1-e-01483t)，低剂量组ft=0.10620×(1-e-01051t)。由合成动力学曲线可知，随赖氨酸摄入量增加，大鼠血浆IgG中2H-丙氨酸丰度达到稳态的时间缩短，稳态丰度呈下降趋势。
　　结论:
　　低剂量赖氨酸能显著减少大鼠的体重和进食量，且短期内就能体现出对大鼠体重的影响效果。低剂量赖氨酸组血浆IgG含量和TP含量都显著低于高剂量赖氨酸组。随着赖氨酸摄入量的增加，血浆IgG的分数合成率呈增加趋势，稳态丰度均呈下降趋势。综上，大鼠血浆IgG的分数合成率、合成动力学方程均对赖氨酸摄入量具有较高的敏感性。

目录

摘要

英文缩略词表

第一章 前言

1 赖氨酸

1．1 赖氨酸的体内代谢

1．2 赖氨酸营养学功能

1．3 赖氨酸的免疫促进作用

2 免疫球蛋白G

3 同位素示踪技术

3．1 氘和重水

3．2 稳定同位索示踪体内蛋白代谢动力学

4 选题依据

5 方法及创新点

第二章 重水标记大鼠血浆丙氨酸检测方法的建立

1 实验材料

2 实验方法

3 统计学处理

二、结果

1 确定最佳洗脱方案

2 血浆IgG的鉴定

3 确定氘对丙氨酸的标记

三、讨论

四、小结

第三章 日粮赖氨酸摄入量对大鼠血液IgG代谢动力学的影响

1 实验材料

2 实验方法

3 血液IgG分数合成率的计算

4 统计学处理

三、结果

1 大鼠饲料氨基酸检测

2 大鼠日均饲料摄入量的比较

3 大鼠体重的比较

4 血浆IgG浓度的比较

5 血浆总蛋白(TP)浓度比较

6 丙氨酸衍生物GC／MS质谱图

7 血液IgG分数合成率

四、讨论

1 对进食量、体重的分析

2 对血浆IgG含量的影响

3 对血浆TP含量的影响

4 对大鼠血浆IgG分数合成率、代谢动力学方程的影响

五、小结

全文总结

参考文献

致谢

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