紫色杆菌素和脱氧紫色杆菌素对结肠癌HT29细胞抑癌作用和初步机制研究

摘要

研究背景:
　　结肠癌(colorectal cancer，CRC)是最常见的恶性肿瘤之一，近年来发病率和死亡率总体呈上升趋势，位列全球女性和男性常见恶性肿瘤的第二位和第三位。在我国，随着人们膳食结构和生活方式的改变，结肠癌发病率逐年上升，且趋于年轻化。目前，针对结肠癌的主要治疗手段为手术切除，辅以放化疗及生物治疗等，但治疗效果通常不理想，辅助治疗产生的副作用大，预后较差。紫色杆菌素和脱氧紫色杆菌素作为一种蓝紫色的微生物代谢产物，着色力强，并且兼具抗肿瘤、抗革兰氏阳性菌和抗植物致病菌等活性，属于低基因毒性物质，有希望用作食品着色剂和防腐剂，在医药行业也同样具有广泛的应用前景。
　　目的:
　　检测紫色杆菌素和脱氧紫色杆菌素对结肠癌HT29细胞的抑制效果，探索紫色杆菌素和脱氧紫色杆菌素对结肠癌HT29细胞可能的作用机制，为紫色杆菌素和脱氧紫色杆菌素的未来临床应用提供理论基础。
　　方法:
　　用不同浓度的紫色杆菌素或脱氧紫色杆菌素处理结肠癌HT29细胞，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法，检测紫色杆菌素或脱氧紫色杆菌素对HT29细胞的抑制率;用倒置相差显微镜观察紫色杆菌素或脱氧紫色杆菌素对HT29细胞的形态学改变;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western Blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase9表达的变化。同时用透射电镜进一步观察细胞的超微结构变化，用Western Blot法检测Beclin1和P62蛋白是否参与紫色杆菌素或脱氧紫色杆菌素诱导的自噬过程。
　　结果:
　　紫色杆菌素和脱氧紫色杆菌素均能显著抑制结肠癌HT29细胞增殖，呈时间剂量依赖性;倒置相差显微镜观察到紫色杆菌素或脱氧紫色杆菌素干预后显著的细胞形态学改变，在细胞质中可见大量的大小不等的空泡，细胞空泡随药物浓度的增加逐渐增大并增多。随着药物浓度的增加，处于G0/G1期的细胞比例明显增加，S期的比例明显减少;紫色杆菌素和脱氧紫色杆菌素均可以增加HT29细胞凋亡比例，使凋亡蛋白Caspase9和Bax表达上升，并下调抑凋亡Bcl-2的表达;透射电镜进一步证实了紫色杆菌素或脱氧紫色杆菌素干预后的HT29细胞内生成了大量的自噬泡，自噬蛋白Beclin1的表达上升。
　　结论:
　　紫色杆菌素和脱氧紫色杆菌素均能够有效地抑制结肠癌HT29细胞增殖并诱导凋亡和自噬，其凋亡机制可能作用于线粒体介导的内源性通路，Beclin1可能也参与了紫色杆菌素或脱氧紫色杆菌素诱导的自噬过程。

目录

摘要

主要缩略词表

第一章 绪论

1 研究现状和成果

1．1 结肠癌

1．2 细胞自噬和凋亡

1．3 紫色杆菌素和脱氧紫色杆菌素

2 选题依据与研究内容

2．1 选题依据

2．2 研究内容

第二章 紫色杆菌素对结肠癌HT29的作用研究

1 实验材料

1．1 实验仪器

1．2 实验药品与试剂

2 试验方法

2．1 主要试剂配置

2．2 细胞培养

2．3 MTT法检测细胞增殖抑制

2．4 细胞形态学观察

2．5 细胞周期观察

2．6 流式细胞术检测细胞凋亡

2．8 电镜观察自噬超微结构变化

2．9 免疫印迹法检测自噬蛋白Beclin1和P62

2．10 统计学方法

3 结果与讨论

3．1 紫色杆菌素对HT29细胞增殖抑制率的结果

3．2 紫色杆菌素对HT29细胞的形态的影响

3．3 紫色杆菌素对HT29细胞周期的影响

3．4 紫色杆菌素诱导的HT29细胞凋亡率的检测

3．5 免疫印迹法检测凋亡蛋白结果

3．6 电镜结果

3．7 自噬蛋白检测结果

4 小结

第三章 脱氧紫色杆菌素对HT29细胞的作用研究

1 实验材料

1．1 实验仪器

1．2 实验药品与试剂

2 试验方法

2．1 主要试剂配置

2．2 细胞培养

2．3 MTT法检测细胞增殖抑制

2．4 细胞形态学观察

2．5 细胞周期观察

2．6 流式细胞术检测细胞凋亡

2．7 免疫印迹(Western Blot)检测凋亡蛋白Caspase9、Bax和Bcl-2的表达

2．8 电镜观察自噬超微结构变化

2．9 免疫印迹法检测自噬蛋白Beclin1和P62

2．10 统计学方法

3 结果与讨论

3．1 脱氧紫色杆菌素对结肠癌HT29细胞增殖抑制率的结果

3．2 脱氧紫色杆菌素对HT29细胞形态的影响

3．3 脱氧紫色杆菌素对HT29细胞周期的影响

3．4 脱氧紫色杆菌素诱导的HT29细胞凋亡率的检测

3．5 免疫印迹法检测凋亡蛋白结果

3．6 电镜结果

3．7 自噬蛋白检测结果

4 小结

1 研究成果

2 本研究不足

3 展望

参考文献

攻读硕士期间的学术经历和学术成果

致谢

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