淋巴瘤荷瘤小鼠炎症与肿瘤高凝状态相关性及南蛇藤素干预研究

摘要

目的:
　　课题通过建立淋巴瘤Balb/C小鼠模型，观察荷瘤模型鼠外周血炎症因子、凝血指标、血小板活化指标和免疫指标的水平变化，及瘤体组织中肿瘤相关巨噬细胞的表达，研究肿瘤免疫炎性微环境与高凝状态的关系，并初步探讨中药南蛇藤素干预淋巴瘤的治疗机制。
　　方法:
　　1、本课题选用具有正常免疫功能的Balb/C小鼠，建立B细胞淋巴瘤荷瘤模型。将25只6-8周龄的Balb/C小鼠随机分为对照组(n=5)、荷瘤干预组(n=10)及荷瘤未干预组(n=10)。荷瘤组皮下注射浓度为2×106/0.2 mL的38B9细胞，对照组予0.2 mL PBS缓冲液皮下注射;荷瘤第14 d时进行MRI和B超等影像学检查，确认小鼠肿瘤形成;荷瘤干预组予以南蛇藤素灌胃干预10d，观察小鼠若处在濒死状态，及时处死小鼠，取肿瘤组织行HE及免疫组化染色。2、分别于荷瘤1d、14 d、21 d经小鼠眼球内眦静脉取血，采用ELISA法检测血浆中CRP、TNF-α、IL-6、IL-10、TF、vWF等水平。3、采用流式细胞术检测小鼠外周血调节性T细胞及B细胞数量以及P选择素、GPⅡ bⅢa等血小板活化指标的表达水平。4、采用免疫组化法检测CSF-1R和CD68在荷瘤小鼠瘤组织中的表达。
　　结果:
　　1、荷瘤后14 d Balb/C小鼠皮下瘤块形成，成瘤率100％，病理特征为淋巴瘤细胞弥漫分布，且瘤块大量表达CD19。
　　2、采用38B9淋巴瘤细胞成功荷瘤Balb/C小鼠，与荷瘤前相比，荷瘤组小鼠外周血CRP、TNF-α、IL-6水平均上升(P＜0.05)，而IL-10水平降低(P＜0.05);荷瘤组小鼠血浆TF、vWF水平上升(P＜0.05);淋巴瘤荷瘤小鼠CRP、TNF-α、IL-6分别与TF、vWF水平呈正相关，IL-10与TF、vWF水平呈负相关。
　　3、南蛇藤素干预后，小鼠肿瘤生长缓慢，平均生存期明显延长(P＜0.05)，且瘤重和瘤体积明显小于未干预组(P＜0.05);干预组小鼠外周血CRP、TNF-α、IL-6等促炎因子水平下降，而IL-10等抑炎因子水平上升(P＜0.05);血浆TF水平下降(P＜0.05)，vWF有下降趋势;CD41/CD62p明显降低(P＜0.05)，而CD41/CD61无明显变化;干预组小鼠瘤组织CSF-1R、CD68表达阳性率明显下降(P＜0.05)。
　　结论:
　　1、Balb/C小鼠B细胞淋巴瘤动物模型成功建立。
　　2、淋巴瘤中炎性因子与肿瘤高凝状态密切相关。
　　3、南蛇藤素可通过降低炎性因子分泌、改善免疫炎性微环境、控制高凝状态等途径有效干预肿瘤进程。

目录

摘要

符号说明

引言

第一部分 淋巴瘤小鼠荷瘤模型的构建

1 材料和试剂

2 实验方法

3 结果

第二部分 荷瘤小鼠炎症因子与肿瘤高凝状态相关性

1 材料和试剂

2 实验方法

3 统计学分析

4 结果

第三部分 南蛇藤素在体内外对38B9淋巴瘤细胞的干预作用

1 材料和试剂

2 实验方法

3 统计学分析

4 结果

讨论

结论

参考文献

文献综述 非可控性炎症恶性转化与肿瘤相关性血栓

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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