不同鹅品种卵泡组织学差异及产蛋量候选SNPs位点鉴定

摘要

鹅产蛋量作为鹅业生产中至关重要的经济性状，不仅关系到养殖经济效益，还与鹅产业发展与壮大密切相关。不同鹅品种产蛋量差异很大，高产品种的年产蛋量可达70个以上，低产品种的年产蛋量仅为20个左右。为揭示不同鹅品种产蛋性能差异原因，本研究以产蛋量不同的扬州鹅、浙东白鹅、卡洛斯鹅为研究对象，比较不同鹅品种卵泡组织学、生殖激素分泌量的差异，并分析不同品种产蛋量候选的SNPs位点基因频率分布，进一步鉴定SNPs突变位点对鹅产蛋量的影响。研究旨在揭示不同鹅品种产蛋性能差异原因，同时也为提高鹅产蛋性能提供一定的参考依据。主要研究结果如下:
　　1.为从卵泡组织学揭示不同鹅品种产蛋性能差异，对产蛋期的不同鹅品种卵泡形态结构进行了研究观察，结果显示，扬州鹅等级卵泡一般以5～6枚居多，浙东白鹅和卡洛斯鹅一般以3～4枚居多，在等级前卵泡数量上，浙东白鹅最多，达69～75枚，其次为扬州鹅，卡洛斯鹅最少。石蜡切片结果显示，扬州鹅小白卵泡（small white follicle，SWF）、大白卵泡（large white follicle，LWF）、小黄卵泡(small yellow follicle，SYF)和大黄卵泡(large yellow follicle，LYF)的颗粒层厚度分别为13.62±0.89μm，20.53±1.35μm，22.50±1.44μm，24.69±l.30μm，均显著高于其他两种鹅，表明鹅产蛋量的高低主要取决于等级卵泡数量以及等级前卵泡颗粒层厚度。同时采用ELISA试剂盒对各品种生殖激素进行检测，结果显示，不同鹅品种促卵泡素(follicle stimulating hormone，FSH)在等级前卵泡发育时期维持在一定浓度(16.82～20.11U/L)。扬州鹅LYF的促黄体素(luteinizing hormone，LH)达884.17±39.44pg/mL，显著高于浙东白鹅(503.09±34.76pg/mL)和卡洛斯鹅(485.56±16.17pg/mL)。扬州鹅孕酮(progesterone，PROG)含量在进入LWF时期后迅速上升，显著高于浙东白鹅和卡洛斯鹅，并且这种趋势维持到LYF时期，上述表明，高分泌量的LH和PROG有助于等级前卵泡发育。
　　2.为从分子水平揭示不同鹅品种产蛋性能差异，以产蛋量关键候选基因MAGI-1、KLAA1462、ARHGAP21、ACSF2和ASTN2基因为研究对象，分析其在不同鹅品种基因频率分布，结果显示，ARHGAP21基因Record-112359位点，ACSF2基因Record-106582位点和ASTN2基因Record-111407位点基因频率分布差异均达显著水平;其中ACSF2基因Record-106582位点基因频率分布差异最大(xc2=92.377，Pc=2.29×10-22)，扬州鹅A基因频率0.71显著高于卡洛斯鹅0.06，表明ACSF2基因A＞C突变可能与不同鹅品种产蛋量差异有关。
　　3.为进一步验证产蛋候选基因SNPs位点功能，选择MAGI-1基因Record-106975位点和ACSF基因Record-106582位点作为候选位点，采用实时荧光定量PCR对不同基因型表达量进行检测，结果发现MAGI-1基因AG基因型mRNA表达量(1.87±0.37)显著高于AA基因型(1.01±0.33)和GG基因型（1.00±0.35），AA基因型和GG基因型差异不显著，ACSF2基因CC基因型(1.11±0.07)显著高于AA基因型(1.00±0.04)，AA基因型显著高于AC基因型(0.65±0.04)。进一步利用EMSA技术对突变前后转录因子结合位点进行功能分析，结果显示ACSF2基因Record-106582A＞C位点影响了转录因子顺式作用元件，从而引起ACSF2基因CC基因型高表达，结合ACSF2基因Record-106582位点在产蛋量不同的鹅品种中的基因频率分布差异，说明该SNP位点与产蛋性能有关。
　　综上，产蛋量高低主要取决于等级卵泡的数量以及等级前卵泡颗粒层厚度，且ACSF2基因Record-106582A＞C位点突变也与产蛋性能有关。

目录

摘要

符号说明

第一章 文献综述

1 研究背景

2 性成熟家禽卵泡的发育

2．1 家禽卵泡发育

2．2 家禽闭锁卵泡

3 生殖激素对家禽卵泡发育的影响

3．1 家禽主要生殖激素的概述

3．2 生殖激素对家禽卵泡发育的调节

4 SNPs及其在家禽产蛋性能的应用

4．1 SNPs分子标记的研究

4．2 SNPs在家禽产蛋性能的应用

5 内含子及其对基因转录的调控作用

5．1 内含子的起源和进化

5．2 内含子的类型

5．3 内含子对转录的调控作用

6 本研究目的意义

第二章 不同品种鹅卵泡形态与组织学比较

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．2 实验方法

1．3 数据分析

2 结果与分析

2．1 不同鹅卵泡形态学比较

2．2 不同鹅等级前卵泡组织学比较

2．3 不同鹅等级前卵泡生殖激素比较

3 讨论

第三章 鹅产蛋量候选SNPs位点鉴定

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．2 实验方法

1．3 统计原理与数据分析

2 结果与分析

2．1 产蛋候选基因SNPs检测

2．2 产蛋候选基因SNPs位点基因型与基因频率分析

2．3 不同基因型个体mRNA表达量分析

2．4 转录因子结合位点分析

2．5 内含子表达载体和定点突变载体构建及其活性检测

2．6 转录因子鉴定

3 讨论

全文结论

参考文献

致谢

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