Vasohibin1、VEGF及Glut-1基因在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

摘要

目的:肿瘤在生长及转移过程中伴随着大量新生血管的生成及糖代谢增加。血管新生需要血管生长促进因子及血管抑制因子共同作用，血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF)是最重要的血管生长促进因子，它主要通过刺激内皮细胞(Endothelial Cells，ECs)的增殖和迁移促进新生血管的形成，而血管生长抑制因子则有新近发现的血管生长抑制因子(Vasohibin，VASH)，包括VASH1及VASH2。糖代谢增加则与葡萄糖转运蛋白表达上调关系密切，目前已发现的葡萄糖转运蛋白(glucose transporter，Glut)有8种不同功能的亚型，其中跨膜转运能力最强的为Glut-1，在恶性肿瘤组织中，肿瘤细胞中Glut-1基因的表达增多，导致细胞外葡萄糖向细胞内转运增多，从而增强细胞增殖，促进肿瘤生长。本文旨在通过qRT-PCR和免疫组织化学SP染色法分别检测结直肠癌组织及其癌旁正常组织中VASH1、VEGF、Glut-1的mRNA和蛋白的表达，并结合临床病理资料分析其与结直肠癌发生、发展、侵袭和转移的关系。
　　方法:选取扬州大学临床医学院（江苏省苏北人民医院）胃肠外科2014年3月～2015年3月行手术治疗的64例结直肠癌组织和癌旁正常组织标本（距离癌组织边缘5cm以上）。所有患者术前均未接受过化疗、放疗及生物治疗，所有标本均由术后病理确诊并有相应的临床病例资料。所有大体标本均在术中切下后半小时内切取，并均分成两份，一份迅速置入液氮后转-80℃冰箱冻存;另一份浸入福尔马林溶液固定后放入4℃冰箱保存。应用免疫组织化学(Immunohistochemical，IHC)染色法检测VASH1、VEGF、Glut-1蛋白在组织中的表达情况;应用Quantitative Real-time PCR(qRT-PCR)检测VASH1、VEGF、Glut-1mRNA的表达情况及其与临床病例特征的关系。
　　结果:VASH1、VEGF、Glut-1在癌组织中的表达均高于癌旁正常组织，三者在癌组织中的表达与浸润范围、淋巴结转移、有无远处转移、病理分期相关，其表达随浸润范围的增加、淋巴结转移的增多逐渐上调（均P＜0.05），而与患者年龄、性别、肿瘤直径、肿瘤分型、有无血管侵犯无相关性。VASH1表达与VEGF、Glut-1互呈正相关(r=0.9058，p＜0.001;r=0.9251，p＜0.001;r=0.9468，p＜0.001)。生存分析提示N分期、TNM分期、及VASH1、VEGF、Glut-1是否阳性表达是影响生存率的危险因素，具有统计学意义(P＜0.05);而性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、T分期、M分期与生存率的影响无统计学意义。进一步将危险因素纳入Cox回归分析中，TNM分期、VEGF阳性表达是影响生存预后的独立的危险因素(P＜0.05)
　　结论:结直肠癌组织中VASH1、VEGF、Glut-1的mRNA和蛋白表达水平高于癌旁正常组织;VASH1表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、T分期、淋巴结转移、远处转移相关;VEGF表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、T分期、淋巴结转移、远处转移相关;Glut-1表达与TNM分期、T分期、淋巴结转移、远处转移相关;VASH1、VEGF、Glut-1在结直肠癌组织中的表达水平互呈正相关;VASH1、VEGF、Glut-1是否阳性表达是影响生存率的危险因素，TNM分期、VEGF阳性表达是影响生存预后的独立的危险因素。

目录

摘要

符号说明

前言

材料与方法

1．实验材料

1．1 研究对象

1．2 实验试剂

1．3 主要实验仪器

2．实验方法

2．1 引物设计与合成

2．2 组织总RNA提取

2．3 逆转录反应

2．4 qRT—PCR反应

2．5 免疫组织化学SP法

3．统计学方法

结果

3．结直肠癌组织VASH1、VEGF、Glut-1 mRNA的表达与Il訇床病理特征的关系

4．结直肠癌组织VASH1、VEGF、Glut-1蛋白的表达与临床病理特征的关系

5．结直肠癌组织VASH1、VEGF、Glut-1表达的相关性

6．结直肠癌组织VASH1、VEGF、Glut-1的表达与患者生存预后分析

讨论

结论

参考文献

附录

致谢

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