摘要
符号说明
第一章文献综述
1研究背景
2禽类卵泡发育
2．1禽类卵泡发育特点
2．2禽类卵泡等级发育
3卵泡颗粒细胞的作用
4卵泡发育激素调节机制
5 miRNA研究进展
5．1 miRNA调控TGF-β信号通路
5．2 miRNA对卵泡发育的作用
6．1 TGF-β信号通路成员及经典途径
6．2 TGF-β／SMADs信号通路对miRNA转录调控作用
6．3 TGF-β信号通路对卵泡发育的调控作用
7研究目的及意义
第二章miR-26b-5p对鹅卵泡颗粒细胞增殖的作用
1引言
2实验材料
2．1实验动物
2．2实验主要仪器
2．3材料与试剂
3实验方法
3．1鹅卵泡颗粒细胞分离与培养
3．2鹅卵泡颗粒细胞传代
3．3鹅卵泡颗粒细胞免疫荧光染色鉴定
3．4过表达miR-26b-5p后鹅卵泡颗粒细胞增殖与凋亡水平检测
3．5总RNA提取与实时荧光定量PCR
3．6细胞上清液类固醇激素含量检测
4数据统计与分析
5结果与分析
5．1鹅卵泡颗粒细胞的分离与鉴定
5．2 miR-26b-5p对鹅卵泡颗粒细胞增殖的影响
5．3 miR-26b-5p对鹅卵泡颗粒细胞类固醇激素分泌的作用
6讨论
第三章miR-26b-5p靶向INHBB参与卵泡颗粒细胞增殖
1引言
2实验材料
2．1实验动物
2．2实验试剂与仪器
3实验方法
3．1靶基因预测
3．2细胞培养与总RNA提取
3．3鹅基因组DNA提取
3．4双荧光素酶载体构建
3．5双荧光素酶报告基因检测
3．6 INHBB蛋白水平检测
3．7细胞上清液中抑制素含量检测
4数据处理与分析
5实验结果
5．1鹅miR-26b-5p靶基因预测
5．2双荧光素酶试验结果
5．3 miR-26b-5p靶向抑制INHBB基因表达量
6讨论
第四章转录因子SMAD4调控miR-26b-5p参与鹅卵泡颗粒细胞增殖
1引言
2实验材料
2．1实验动物
2．2实验材料与仪器
3实验方法
3．1细胞培养
3．2转录结合位点预测
3．3总RNA提取与SMAD4基因扩增
3．4载体构建
3．5 qRT-PCR
3．6双荧光素酶活性测定
5．2过表达SMAD4对miR-26b-5p的作用
5．3 TGF-β特异性阻断剂对相关基因表达的作用
5．4 TGF-β特异性阻断剂处理对细胞增殖的影响
5．5 TGF-β特异性阻断剂处理后对激素分泌的影响
6讨论
7小结
全文结论
创新点
进一步工作设想
参考文献
致谢
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