弓形虫GRA6和SAG1基因克隆及其表达产物的应用研究

摘要

目的;从弓形虫昆山分离株和RH株总DNA中克隆GRA6基因片段,构建重组质粒pGEX-GRA6,与该实验室已构建好的重组质粒pGEX-SAG1分别导入大肠杆菌中表达,且对表达产物进行纯化,以纯化的该两种重组蛋白作为诊断抗原,构建新型弓形虫基因工程诊断试剂合,用于检测弓形虫感染及鉴别急、慢性期弓形虫病.结论:1.①怀形虫昆山分离株和RH株GRA6基因片段几乎完全一致;②在大肠杆菌中得到了高效表达的可溶性重组蛋白GST-GRA6;③该重组蛋白能被弓形虫感染者血清特异性IgM和IgG所识别,可用于构建具有高度敏感性和特异性的弓形虫感染检测试剂盒.用纯化的GRA6重组蛋白构建的ELISA诊断试剂盒和DIGFA诊断试剂盒对弓形虫感染者血清进行检测,其结果一致.2.①在大肠杆菌中表达了GST-SAG1重组蛋白;②通过改变培养温度和LB培养液pH,首次成功地在上清液中得到了可溶性SAG1重组蛋白;③该可溶性重组蛋白能被急性期弓形虫感染者血清IgM所识别,可用于构建弓形虫检测试剂盒,鉴别急、慢性期弓形虫感染.

目录

文摘

英文文摘

序言

第一部分弓形虫速殖子的分离与提纯及总DNA抽提

第二部分弓形虫GRA6抗原基因的克隆与表达

材料与方法

结果

讨论

第三部分弓形虫SAG1可溶性蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化

材料与方法

结果

讨论

第四部分弓形虫GRA6可溶性蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化

第五部分弓形虫SAG1基因抗原ELISA法诊断试剂盒研制

材料与方法

结果

讨论

第六部分弓形虫GRA6基因抗原ELISA法诊断试剂盒研制

第七部分弓形虫GRA6基因抗原DIGFA法诊断试剂盒研制

结论

参考文献

综述弓形虫分子生物学的研究与诊断应用

一.弓形虫基因组研究和期特异性基因研究进展

1.弓形虫基因组研究

2.弓形虫期特异性基因研究进展

二.弓形虫抗原基因克隆与表达及相关产物的在诊断中应用

1免疫球蛋白IGG对弓形虫抗原的亲和力(avidity)检测

2抗原基因的克隆与表达及诊断性应用

3PCR认断弓形虫病的研究进展

4基因芯片和蛋白芯片在弓形虫病诊断中应用

结语

参考文献

攻读学位期间公开发表的论文

附录

致谢