柞蚕核型多角体病毒分子生物学及杆状病毒感染特性

摘要

把感染柞蚕肾的ApNPV进行分离纯化,提取较纯净的ApNPV,抽提ApNPV基因组DNA,并对ApNPV构建了HindⅢ、SalⅠ两种限制性内切酶的DNA片段文库,进行了部分基因的序列分析,为该病毒的全基因组序列的进行打下了基础.对ApHPV、w-BmNPV(野桑蚕)、BmNPV进行RAPD分析,研究结果表明,ApNPV与CfNPV的进化关系最近,与w-BmNPV的亲缘关系较远,与BmNPV的亲缘关系最远.为了便于检测核型多角体病毒对昆虫的感染情况,将荧光标记分子GFP克隆到昆虫杆状病毒转移载体pBacPAK8中,与经Bsu36I酶切线型化的Ac-BacPAK6共转染Sf21细胞,经空斑纯化获得重组病毒Ac-BacPAK6-GFP.可以检测病毒在不同细胞中的增殖和在虫体的不同组织中的增殖.把单一的病毒粒子分别感染BmN和Sf21细胞作为对照,同时把不同的病毒粒子混合,再分别感染BmN和Sf21细胞.研究结果表明:ApNPV病毒不能感染BmN和Sf21细胞.当其DNA单独转染到细胞时,细胞在不同程度上表现出凋亡症状,这是病毒与细胞之间不亲和的表现;AcMNPV和BmNPV在亲和的病毒的协同下,分别能在BmN和Sf21细胞中复制.BmNPV在单独感染Sf21细胞时表现出的个别细胞有类似多角体的颗粒的现象,有待构建重组GFP的BmNPV以进一步证实;AcMNPV和BmNPV的病毒粒子可以进入BmN及Sf21细胞,并能释放出DNA,这是以前试验并没有注意到的;ApNPV的部分序列的同源性分析表明,与CfNPV的亲缘关系较近,而与BmNPV及AcMNPV的亲缘关系较远.从感染性来分析,可能亲缘关系近的病毒之间更容易引起原本不具备侵染性的病毒产生侵染特性,这可能为宿主域拓展的研究提供有价值的信息.

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文摘

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引言

杆状病毒宿主域的分子生物学研究(文献综述)

第一章一般材料和分子克隆常用方法

第二章柞蚕核型多角体病毒的分离纯化

第三章野桑蚕、家蚕、柞蚕核型多角体病毒基因组的RAPD分析

第四章重组GFP-AcMNPV病毒的构建

第五章杆状病毒感染性的检测

结论

参考文献

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致谢