PD-L1转基因细胞的构建及功能性鼠抗人PD-L1单克隆抗体的研制

摘要

B7-CD28途径作为经典的协同刺激途径,已受到广泛深入的研究.最近B7超家族新成员PD-L1(Ligand 1 of programmed death-1)的发现,为协同刺激途径开辟了新思路.PD-L1被证实是PD-1的受体,通过与CD28家族新成员PD-1的IgV样结构域相互结合,将所产生的信号传至PD-1胞浆区尾部的ITIM基序(免疫受体酪氨酸抑制基序),在免疫应答中,对T、B淋巴细胞及非淋巴组织发挥重要的负性调控作用.最近有文献证明PD-L1存在第二受体,在机体的免疫应答中发挥正性调节作用.有研究证明该途径在自身免疫病或肿瘤免疫中发挥重要作用,因此可通过制备特异性抗PD-L1单抗或其可溶性抑制因子,对该途径进行阻断,以增强CTL杀伤癌细胞的功能;或者将编码PD-L1基因的重组病毒载体,设计抗原特异性病毒载体疫苗,对自身免疫病或肿瘤进行免疫干预性治疗.该研究旨在通过PD-L1转基因细胞的构建和其单抗的研制,进一步探讨PD-L1信号发挥作用的分子机制及与之相关自身免疫病、肿瘤发生的关系.第一部分——PD-L1转基因细胞的构建.利用PCR的方法从人心cDNA文库中扩增出PD-L1基因并构建含PD-L1基因的重组逆转录病毒载体,最终转染L929细胞,成功构建了稳定高表达PD-L1分子的细胞株PD-L1/L929.第二部分——探讨PD-L1信号在PHA体外激光体系中对人外周血T细胞的协同调节作用.第三部分——鼠抗人PD-L1单抗的研制.第四部分——2H11单抗对PD-L1信号在T细胞增殖和DC发育成熟中的生物学作用的研究.综上所述,该研究成功构建了稳定高表达PD-L1分子的转基因细胞株PD-L1/L929,并首次发现PD-L1信号能抑制PHA介导的T细胞活化诱导凋亡.同时还成功研制出稳定分泌特异性功能型鼠抗人PD-L1单克隆抗体,该单抗能通过逆向信号,诱导T细胞的增殖和IL-10的分泌,并且能抑制不成熟DC的发育成熟和一些协同刺激分子的表达.该研究所取得的创新性成果,为深入开展PD-L1分子发挥作用的信号途径、与免疫疾病的关系、可溶性PD-L1检测试剂盒的研制以及人源化PD-L1单抗的临床应用开发提供了理论依据和实验基础.

目录

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缩写词表

研究背景

1 PD-L1基因定位及其表达及其与B7家族成员的关系

2 PD-L1信号及其作用

3 PD-1-PD-L途径在机体中的作用

4 PD-L-PD-1途径在自身免疫病中的作用机制

5 PD-1/PD-L途径与移植免疫

6 PD-1/PD-L途径干预在肿瘤治疗中的应用价值

7 PD-1/PD-L途径在抗感染免疫中的作用

参考文献

第一部分人PD-L1转基因细胞PD-L1/L929的构建及其生物学功能的研究

Part A人PD-L1基因的克隆及其转基因细胞PD-L1/L929的构建

材料和方法

结果

讨论

参考文献

Part B PD-L1/L929细胞株的生物学功能研究-PD-L1信号对T细胞体外激发的调节作用

第二部分功能型鼠抗人PD-L1单克隆抗体的研制及其生物学功能研究

Part A功能型鼠抗人PD-L1单克隆抗体的研制

材料与方法

结果

讨论

参考文献

Part B鼠抗人PD-L1单抗生物学功能的研究—单抗2H11对人外周血T细胞的增殖及DC活化成熟的影响

材料和方法

结果

讨论

参考文献

小结与展望

研究生学习期间发表和待发表论文情况

本课题的资助情况

致谢

附录(综述)