DC疫苗在hu-SCID小鼠B淋巴瘤及乳腺癌治疗中的实验研究

摘要

本课题研究目的是建立人源化SCID小鼠(hu-SCID)B淋巴瘤模型，探讨DC、CTL、激发型CD40单克隆抗体5c¨的不同组合对B淋巴瘤的治疗作用：建立hu-SCID乳腺癌模型，探讨DC及DC联合PDLl单克隆抗体2H1l对乳腺癌的治疗作用，为构建B淋巴瘤和乳腺癌的安全有效的DC肿瘤疫苗提供实验依据。 1.人源化SCID小鼠模型的建立及鉴定。 SCID小鼠连续4天腹腔注射环磷酰胺(CTX)抑制骨髓造血，第5天通过腹腔注射移植人外周血单个核细胞(PBMC)。移植4周、8周、12周后分别收集外周血、脾脏、肝脏。荧光显微镜下观察SCID小鼠外周血中人CD3+、CDl9+细胞；流式细胞仪测定小鼠全血中人CD3+、CDl9+细胞百分率：免疫组织化学分析SCID小鼠肝脏和脾脏中人CD3+、CDl9+细胞；ELISA检测SCID小鼠血清中人免疫球蛋白IgG含量。结果显示：(1)SCID小鼠移植人外周血单个核细胞4周、8周、12周后在小鼠外周血中通过荧光显微镜下可观察到人CD3+、CDl9+细胞，4周后流式细胞仪测得小鼠外周血单个核细胞中人CDl9+、CD3+细胞百分率分别为10．6％、31．7％：(2)免疫组织化学结果显示在小鼠脾脏中存在人CD3+、CDl9+细胞；(3)移植人外周血单个核细胞4周、8周、12周后ELISA测得小鼠血清中人免疫球蛋白IgG的含量分别为3901xg／ml、n001xg／ml、1040[tg／ml，由此证明，成功地建立了人源化SCID小鼠模型，为实验奠定了物质基础。 2．DC疫苗在B淋巴瘤治疗中的实验研究。 在上述工作基础上，选用人B淋巴瘤细胞株Daudi在hu-SCID小鼠腹股沟皮下注射，建立hu-SCID的B淋巴瘤模型。接种25天后，分别给予经凋亡Daudi细胞负载的成熟DC、未成熟DC(imDC)、肿瘤抗原特异性CTL、激发型CD40单抗5cll联合或单独治疗。imDC+5cil组治愈小鼠3个月后进行肿瘤再负荷。通过观察小鼠状态、绘制肿瘤生长曲线、生存期观察评价疗效。ELISA检测小鼠血清中IFN．Y浓度；免疫组化分析小鼠肿瘤组织和肝脾组织中活化T细胞和DC的浸润。 实验结果显示：除5cll组外，各治疗组荷瘤小鼠肿瘤体积均有不同程度缩小；各治疗组都有完全缓解(CR)的小鼠，imDC+5cll组CR率达80％，生存期明显延长，3个月后进行的肿瘤再负荷实验结果显示：经DC疫苗治疗的小鼠对肿瘤的抵抗能力明显增强；小鼠血清中在治疗后3周仍可测到IFN．Y。免疫组化显示，除5cll组外，各治疗组荷瘤小鼠肿瘤组织和肝脾组织中均有活化T细胞和DC的浸润。 3．DC疫苗联合PD-L1单抗治疗人乳腺癌的作用研究。 业已表明，肿瘤细胞表达的PD-L1在肿瘤逃逸中起着重要的作用。本实验选用高表达PD-L1的人乳腺癌细胞株M231、低表达PD-L1的人乳腺癌细胞株M435，构建了转基因细胞M435-PDLl，继而将激发型CD3单抗、T细胞与乳腺癌细胞株共培育，同时加入抗人PD-L1单抗2H11，采用3H-TdR测定T细胞的增殖和流式细胞仪测定T细胞胞浆内IFN．Y。结果显示：2H11能阻断肿瘤细胞和活化T细胞间PDLl．PDl途径，促进T细胞增殖及IFN．Y分泌。 选用人乳腺癌细胞株M231、M435，常规方法建立转基因细胞株M435-PDLl在hu-SCID小鼠腹股沟皮下注射，建立hu-SCID的乳腺癌模型。接种3周后，分别给予经凋亡细胞负载的成熟DC、成熟DC(imDC)联合2H1l治疗。通过观察小鼠状态、绘制肿瘤生长曲线、生存期观察评价疗效。ELISA检测小鼠血清中IFN—Y浓度；免疫组化分析小鼠肿瘤组织和肝脾组织中活化T细胞和DC的浸润。 结果显示：经DC、DC联合2H1l治疗的小鼠肿瘤缩小，生存期延长，DC联合2H1l组治疗效果优于DC组。治疗后小鼠血清中均检测到IFN-y，肿瘤组织和肝脾组织中有活化T细胞和DC浸润。 综上所述，本研究建立了人源化SCID小鼠模型，并对人源化SCID小鼠B淋巴瘤模型和乳腺癌模型进行DC肿瘤疫苗的治疗。imDC+5cll治疗B淋巴瘤效果由于其他各组：DC联合2H11治疗乳腺癌效果比单独使用DC治疗好。这些均为DC疫苗的临床应用提供了动物实验依据。

目录

文摘

英文文摘

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缩略词表

研究背景

第一部分人源化SCID小鼠模型的建立及其鉴定

第二部分DC疫苗在B淋巴瘤治疗中的实验研究

第三部分 DC疫苗PD-L1单抗治疗人乳腺癌的作用研究

小结与展望

博士研究生期间发表的论文

本课题所获的基金资助

致谢