血管性血友病分型组合实验的建立和临床应用

摘要

目的：(1)建立表达重组糖蛋白Iba活性片段(rGPIba H1-V289)细胞株，并且纯化其表达产物，研究其生物学功能。 (2)通过rGPIba表达产物建立一种新的检测VWF:RCO的酶联免疫吸附(ELISA)方法，并探讨其在血管性血友病诊断中的应用价值。 (3)比较VWF在正常人组不同ABO血型个体间质和量的差异。(4)建立一套系统的检测VWD的诊断和分型组合实验方法，为VWD的诊断和分型提供更准确的实验室依据。 方法： (1)利用脂质体将含有编码GPIba H1-V289 DNA质粒pCMV3转染CHO细胞，用亲和层析法纯化重组片段。 (2)以抗GPIba的单克隆抗体2D4-IgG为包被抗体捕获r GPIba，建立VWF：RCO-ELISA法。同时对其敏感性、重复性作方法学评估，并与血小板凝聚法检测VWF：RCO进行比较。 (3)采用ELISA法检测正常人组(不同ABO血型)、VWD组及其它出血性疾病组血浆VWF：Ag、VWF:CB、VWF：RCO、VWF：FVⅢB，采用智能血液凝集仪检测RIPA水平，采用非连续缓冲体系的琼脂糖凝胶电泳进行VWF多聚物分析。 结果： (1)经转染的CHO细胞培养上清含有高表达的rGPIba，纯化重组片段能抑制瑞斯托霉素诱导的血小板聚集功能。 (2)运用ELISA法检测VWF：RCO，VWD患者组与正常人组比较，差异有统计学意义(P=0.0001)；其它出血性疾病组与正常组比较，差异无统计学差异(P>0.05)，该法测定的批内和批间变异分别为5.4％和9.4％。血小板凝聚法检测VWF：RCO其批内和批间变异分别为17.8％和18.3％。 (3)O型血个体其VWF，Ag、VWE:RCO及VWF，CB均低于非O型血，差异有显著统计学意义(P<0.001)。 (4)采用PLT和APTT作为VWD的筛选试验，VWF、Ag、VWF:CB和VWF：RCO-ELISA为确诊试验，RIPA、VWF：FVmB和多聚物分析为分型试验。 结论：(1)CHO细胞株能恒定表达rGPIbaH1-V289，重组片段具有较高的纯度、免疫学活性和生物学活性。 (2)VWF：RCO-ELISA法操作简便，特异性、敏感性和重复性均较好；通过VWF：RCO/Ag可以鉴别1型、2型及3型血管性血友病(VWD)患者。 (3)O型血较非O型血个体有更高的出血倾向，在临床诊断VWD的过程中要充分考虑ABO血型系统对血浆VWF水平的影响。 (4)本研究所建立的检测方法和优化组合适合大多数VWD患者的诊断和分型需要，对VWD患者的诊断、治疗和预后有重要意义。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

引言

第一部分 重组血小板膜糖蛋白Iba活性片段在CHO细胞中的表达及纯化

材料和方法

结果

讨论

第二部分 VWF瑞斯托霉素辅因子酶联免疫分析方法的建立和临床应用

材料和方法

结果

讨论

第三部分 血管性血友病分型诊断实验的建立

材料和方法

结果

讨论

第四部分 VWF在不同ABO血型个体中质和量差异的实验研究

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

血管性血友病的研究进展

三年学习期间已发表和待发表的文章及参加学术会议交流论文

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