LPS诱导的急性炎症中HIF-1α表达增加的机制研究

摘要

目的：从体内和体外两方面，探讨NF-кB抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性炎症组织中和体外培养的小鼠巨噬细胞内HIF-1表达的影响及其意义。 方法：将Balb/c小鼠分为正常对照组、炎症组、炎症用药组。炎症组采用卡介苗(BCG)配合脂多糖(LPS)尾静脉注射法建立小鼠急性全身性炎症损伤模型。炎症用药组在尾静脉注射脂多糖(LPS)前30分钟腹腔注射NAC，正常对照组给予等量PBS。于注射后5h立即摘除小鼠眼球放血、脱臼法处死小鼠，取出肝脏和肺脏进行常规石蜡切片、HE染色观察脏器的病理改变，免疫组织化学SP法观察HIF-1α及VEGF在组织中的表达，采用RT-PCR法半定量检测组织中HIF-1、VEGF基因mRNA的表达水平，应用ELISA法检测血清TNF-α的表达水平。另取正常Balb/c小鼠，分离腹腔巨噬细胞并将其分为正常对照组、LPS刺激组、不同剂量NAC+LPS组，2小时后将LPS溶液加入LPS组和相应浓度的NAC+LPS组使其终浓度达0.8ug/ml，正常对照组给予等量PBS。培养10小时后，采用RT-PCR法半定量检测各组HIF-1α、TNF-α基因mRNA的表达水平，应用细胞免疫化学染色法检测巨噬细胞HIF-1α、VEGF蛋白的表达水平。 结果：体内实验中，炎症组小鼠血清TNF-α蛋白水平较正常对照组显著增加。炎症用药组小鼠血清TNF-α蛋白水平较炎症组显著降低，肝及肺组织HIF-1α基因表达在mRNA的水平无显著差异，VEGF基因表达的mRNA显著降低，HIF-1α、VEGF在蛋白水平上显著降低。体外培养中，与LPS刺激组比较，NAC+LPS组巨噬细胞HIF-1α基因表达的mRNA无明显改变、TNF-α基因表达的mRNA明显减少。HIF-1α、VEGF蛋白表达显著减少。 结论：预先给予NAC，可使LPS诱导的急性全身炎症反应小鼠血清TNF-α水平显著降低的同时，肝和肺组织HIF-1α蛋白表达水平、VEGF基因mRNA与蛋白表达水平均显著降低；体外常氧条件下培养时，加入NAC可降低LPS刺激下小鼠巨噬细胞TNF-α的基因表达，TNF-α水平的降低可能通过HIF-1α转录后途径下调该蛋白在细胞内的水平，进而下调靶基因VEGF的表达。提示在急性炎症反应时，NF-κB信号通路通过增加TNF-α的表达在转录后水平影响HIF-1α的表达水平。

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论文说明：缩略词表

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前言

第一部分N-乙酰半胱氨酸(NAC)对LPS诱导的急性炎性损伤组织中HIF-1α表达的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

附图

第二部分N-乙酰半胱氨酸(NAC)对体外LPS刺激下小鼠巨噬细胞HIF-1α表达的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

附图

结论

参考文献

综述：炎症引起缺氧诱导因子-1α蓄积的信号通路的研究

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