人B7-H1、B7-H4分子在结肠直肠癌中的表达及人B7-H1第二受体的寻找

摘要

目的：在特异性T细胞的活化过程中，共刺激分子B7家族提供正、负双重信号。B7-H1和B7-H4是新发现的B7家族成员，在调控T细胞免疫反应中发挥重要作用。目前，关于B7-H1和B7-H4在结肠直肠癌上的表达及其在肿瘤发生、发展中作用的报道非常少。本研究将明确B7-H1和B7-H4在人结肠直肠癌组织中的表达情况，并探讨其在结肠直肠癌发生、发展中的作用，为寻找肿瘤新的诊断标志和免疫治疗靶点提供理论依据。 虽然有充分的证据表明B7-H1分子的共刺激功能不是通过PD-1受体介导的，但至今B7-H1共刺激受体仍未明确鉴定出来。本实验将致力于B7-H1第二受体的寻找。 方法： 运用免疫组织化学方法检测60例结肠直肠癌标本中B7-H1和B7-H4的表达情况，并分析其表达与各临床病理参数之间的关系。 构建T7噬菌体展示人T细胞cDNA文库，以B7-H1Ig融合蛋白为靶蛋白，筛选与其有结合关系的多肽或蛋白。 结果： 1.B7-H1和B7-H4在结肠直肠癌标本中均呈阳性表达，在细胞膜、细胞浆内或二者同时表达，而正常结肠直肠组织不表达或低表达。 2.在60例结肠直肠癌组织中，60％的标本B7-H1阳性表达，并且显著高于正常结肠直肠上皮组织(P<0.01)。B7-H1分子表达水平与肿瘤患者性别、年龄、组织类型、肿瘤分级和分期均无相关性(P>0.05)，但与有无淋巴结转移显著相关(P<0.01)。 3.在60例结肠直肠癌组织中，B7-H4的表达率高达83.3％。B7-H4的表达水平与淋巴结是否转移显著相关(P<0.05)，而与患者性别、年龄、肿瘤组织类型、分级和分期均无关(P>0.05)。 4.经测定，构建的T7噬菌体展示cDNA原始文库的效价为2×107pfu/ml，扩增后文库的效价为4×1010 pfu/ml。随机挑取100个噬菌斑进行PCR 鉴定，文库重组率为92％，插入片段大小为300～2000bp，符合文库的构建要求。 5.以B7-H1Ig融合蛋白为靶蛋白筛选人T细胞T7噬菌体展示eDNA文库，目前仍未获得与B7-H1Ig有结合关系的蛋白或多肽。 结论： 1.B7-H1和B7-H4高表达于结肠直肠癌中，不依赖患者的性别、年龄、肿瘤组织类型、分级和分期，仅与有无淋巴结转移相关。 2.B7-H1和B7-H4在结肠直肠癌组织中的过度表达，在肿瘤的发生、发展中发挥一定作用，参与结肠直肠癌细胞的免疫逃逸。 3.B7-H1和B7-H4在正常结肠直肠组织中低表达，而在结肠直肠癌组织中高度表达，有望成为结肠直肠癌新的诊断标志和免疫治疗新靶点。 4.成功构建了人外周血T细胞T7噬菌体展示eDNA文库，为寻找B7-H1的第二受体打下基础。

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文摘

英文文摘

论文说明：缩写词表

声明

序言

第一部分人B7-H1、B7-H4在结肠直肠癌中的表达

第二部分人B7-H1分子第二受体的寻找

小结与展望

参考文献

研究生期间撰写及发表的论文

本研究所获的基金资助

致谢