L-ficolin基因第八外显子多态性与儿童反复呼吸道感染相关性研究

摘要

目的：反复呼吸道感染（recurrent respiratory tract infection RRTI）是儿童期常见病，其发病与多种因素有关，而免疫功能状态尤受关注。近年固有免疫系统中的免疫分子L-ficolin与RRTI的关系研究日益增多。L-ficolin是脊椎动物和无脊椎动物体内广泛存在的寡聚蛋白，有调理素作用，它包括一个胶原样结构域和一个纤维素样结构域（fibrinogen-like domain，FBG）。通过纤维素样结构域L-ficolin可以和革兰氏阳性及阴性细菌[如化脓性链球菌、肺炎链球菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠埃希杆菌]等含有N-乙酰葡糖胺（N-acetylglucosamine GlcNAc）糖配基的微生物结合，激活MBL-相关丝氨酸蛋白酶-1、2（MBL-Associated Serine ProteasesMASP-1，2），经过甘露聚糖结合凝集素（Inannan binding lectin MBL）途径激活补体系统，最终消灭病原体，是人体抵御感染第一道防线中的重要免疫分子。编码L-ficolin的基因（Ficolin2 gene FCN2）位于9q34染色体上，其启动子及外显子都具有多态性。启动子上三个位点（-986，-602和_4）多态性与L-ficolin血清浓度有关，第八外显子多态性与FBG结合能力有关。在第八外显子上两个位点Thr236Met和Ala258Ser发生非同义氨基酸替换，Thr236Met（C>T）形成的FBG与糖配基结合力较弱，而Ala258Ser（G>T）所形成的FBG与糖配基结合力较强。已有多项研究证实RRTI患儿血清L-ficolin浓度明显下降，这种降低是先天的，并非疾病所导致的结果，而且启动子基因多态性决定着L-ficolin的血清浓度，那么决定FBG结合力强弱的第八外显子多态性是否与RRTI相关，FCN2能否成为RRTI致病的候选基因，为了探讨这一问题，我们分析了这两个位点基因型及等位基因频率在常州地区汉族RRTI患儿及正常对照组儿童中的分布，以期发现L-ficolin基因第八外显子多态性是否与RRTI相关，能否成为RRTI的预测基因或其中之一。
　　 方法：采用病例对照研究方法，选取2008年2月～2009年2月间在常州一院就诊的江苏常州市儿童，均为一院儿科病房住院儿童。其中RRTI104例，对照组儿童214例，RRTI诊断标准采用1987年中华儿科学会反复呼吸道感染的标准。通过聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction PCR）进行目的DNA扩增，根据碱基淬灭探针技术检测FCN2第八外显子Thr236Met和Ala258Ser位点单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）。采用基因计数法及x2检验等统计学方法了解两组儿童是否存在差异性。
　　 结果：共检测反复呼吸道感染患儿（病例组）104例，对照组214例。两组性别、年龄无显著差异性。Thr236Met位点基因型分布：野生纯合子CC型在两组中分别占91.3％和90.2％，杂合子TC型分别占8.7％和9.8％，两组中均未检出突变体纯合子基因型-TT。基因型，两组间基因型分布的差异无统计学意义；突变型T等位基因频率在两组中分别为4.3％和4.9％，经检验两组间无统计学差异（P>0.05）。Ala258Ser位点基因型分布：野生纯合子GG基因型分别是63.5％和66.4％，TG杂合子基因型分别是31.7％和31.3％，突变纯合子TT基因型分别占4％和2％，两组间比较基因型分布无显著差异；突变型T等位基因频率在两组中分别为20.7％和18.1％，经检验两组间无统计学意义（P>0.05）。
　　 结论：L-ficolin基因第八外显子Thr236Met和Ala258Ser位点基因多态性及等位基因频率与中国常州地区汉族儿童反复呼吸道感染不相关。