负载供体抗原受体imDC诱导CD4CD25Treg细胞在同种心脏移植免疫耐受中的研究

摘要

目的：通过建立SD大鼠到Wistar大鼠腹腔心脏移植模型，术前经外周静脉输注负载供体抗原受体未成熟树突状细胞（imDC）预处理受体，研究能否有效的扩增受体抗原特异性CD4+CD25+调节性T细胞（Treg），并探索负载供体抗原的受体源性imDC对同种异体移植免疫排斥反应的影响，进而揭示其机理。
　　 方法：采用低剂量GM-CSF体外培养扩增受体大鼠骨髓源性树突状细胞（DC），并在培养过程中加入制备的供体SD大鼠可溶性抗原。倒置显微镜观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞的纯度及成熟度。
　　 供体SD大鼠和受体Wistar大鼠各24只随机分成四组，A组（空白组）：仅行SD大鼠到Wistar大鼠异位同种腹腔心脏移植，在心脏移植前和后对受体不作任何处理。B组（CsA组）：受体Wistar大鼠心脏移植后当天至移植后第9天于受体腹腔内注射CsA10mg/kg/d。C组（inDC组）：受体Wistar大鼠心脏移植前第7天经尾静脉输注负载供体抗原的受体imDC2×106。D组（imDC+CsA组）：受体Wistar大鼠心脏移植前第7天经尾静脉输注负载供体抗原的受体imDC2×106，其他处理同B组。观测指标：移植心脏的存活时间、病理改变，受体Wistar大鼠体内CD4+CD25+Freg细胞变化，T细胞增殖抑制试验，以及血清TGF-βl、IL-10变化等。
　　 结果：（1）供心平均存活时间（MST）：A组：6.8±0.83天，B组：16.24±1.30天，C组：18±2.91天，D组：49.24±8.01天。D组平均存活时间较A、B、C组明显延长，有显著性差异，P<0.05。（2）受体外周血CD4+CD25+T细胞检测结果：A组：2.664±0.47％，B组：2.74±0.43％，C组：7.84±0.51％，D组：8.4±0.60％。C组、D组外周血CD4+CD25+T细胞数量较A组、B组明显升高，P<0.05。C组与D组之间无显著性差异，P>0.05。（3）T细胞增殖抑制试验：实验组抑制率：79.22％，第三方刺激组抑制率：12.77％。负载供体抗原受体imDC诱导出的CD4+CD25+Treg细胞具有抗原特异性。（4）受体外周血TGF-β1检测结果：A组：211.07±5.97pg/mL；B组：210.19±8.08 pg/mL；C组：469.40±10.55pg/mL；D组：477.52±6.51 pg/mL。C、D两组血清中TGF-β1浓度较A组、B两组明显升高，P<0.05。C组与D组之间无显著性差异，P>0.05。（5）受体外周血IL-10检测结果：A组：21.30±1.63 pg/mL；B组：21.20±1.71 pg/mL；C组：50.79±1.59 pg/mL；D组：51.09±1.96 pg/mL。C组与D组间无显著性差异，P>0.05。C、D两组血清中IL-10浓度较A组、B组见有明显升高，P<0.05。
　　 结论：1、外周静脉输注负载供体抗原的受体imDC能够诱导受体内抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞增加。2、术前外周静脉负载供体抗原的受体imDC，联合术后短期使用免疫抑制剂能有效抑制术后急、慢性排斥反应，显著延长同种心脏移植物的存活时间。3、细胞因子参与了CD4+CD25+Treg细胞诱导免疫耐受的过程。