CD34单克隆抗体防治大鼠SAH后CVS及脑保护作用的实验研究

摘要

第一部分大鼠蛛网膜下腔出血后CD34在基底动脉壁的表达变化
　　 目的：探讨大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）后CD34在基底动脉壁中的表达变化，及其与脑血管痉挛（CVS）的关系。
　　 方法：51只健康成年SD大鼠随机分为正常组，对照组（即NS组，枕大池注入等量生理盐水）和SAH组，NS组和SAH组又分为1d，3d，5d，7d，10d五个亚组（NS组n=3，SAH组n=6）。应用枕大池一次注血法制成SAH动物模型；通过HE染色光镜下观察基底动脉的病理学变化，测定血管壁厚度及血管腔内径，以此评价脑血管痉挛；并应用免疫组化法评估大鼠基底动脉管壁CD34在不同时间点的表达。
　　 结果：HE染色显示SAH组基底动脉管腔狭窄，内膜皱褶，平滑肌细胞肥大，3d时病理学变化最显著，管腔狭窄明显，为对照组的60％；管壁明显增厚，约为对照组的2倍，之后狭窄程度渐减轻，10 d时接近正常。SAH后基底动脉壁CD34表达增加，表达高峰为注血后3-5 d，随后开始下降，10 d恢复正常。
　　 结论：1.通过构建大鼠枕大池一次注血模型，能够观察到基底动脉发生明显的细胞形态改变、管壁的增厚以及管腔的狭窄，提示SAH后存在明确的CVS。2.SAH后CD34在基底动脉壁的表达上调，并与CVS的时相一致，提示CD34可能参与了CVS的病理过程。
　　 第二部分CD34单克隆抗体对大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛防治作用的实验研究
　　 目的：探讨CD34单克隆抗体对大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的防治作用及可能作用机制。
　　 方法：30只健康成年SD大鼠随机分成对照组，SAH组，安慰剂组，CD34单克隆抗体低剂量治疗组（LD）和CD34单克隆抗体高剂量治疗组（HD）5个组。应用枕大池一次注血法制成SAH动物模型，治疗组在注血前经枕大池注入CD34单克隆抗体，分为10μg/10μl（LD组）和20μg/10μl（HD组）两个不同剂量组，而安慰剂组注血前仅注射等量生理盐水（NS）。利用常规HE染色的方法观察大鼠基底动脉管壁形态，利用免疫组化的方法观察CD34和Caspase-3在血管壁的表达。
　　 结果：HE染色显示SAH组与安慰剂组的基底动脉内膜出现皱褶，管腔明显狭窄，为正常对照组的60％；管壁明显增厚，约为正常对照组的2倍；HD组基底动脉管径扩大、管壁增厚程度减轻以及CVS值下降，与SAH组和安慰剂组相比差异显著（P<0.05），而LD组的血管痉挛程度和安慰剂组相比无统计学意义（P>0.05）。HD组与LD组比较存在统计学差异（P<0.05）。免疫组化结果显示CD34在SAH组及安慰剂组中膜及内膜下有较强的免疫染色，外膜也可见到散在的染色信号。LD组血管壁CD34表达较SAH组减弱，为轻度或中部染色，而HD组CD34免疫组化染色不明显。SAH组及安慰剂组Caspase-3在血管壁表达较明显，和对照组相比，具统计学意义（P<0.01）。LD组血管壁Caspase-3染色较SAH组有所减弱（P<0.05），为轻度染色；HD组Caspase-3染色不明显，和安慰剂组相比，具统计学意义（P<0.01）。HD组与LD组相比，阳性率也具统计学差异（P<0.05）。
　　 结论：CD34单克隆抗体对SAH后CVS有一定的防治作用，可使痉挛血管壁增厚程度及管腔狭窄程度减轻。其作用机制可能与抑制Caspase-3表达，减轻血管内皮细胞的凋亡有关。
　　 第三部分CD34单克隆抗体对大鼠蛛网膜下腔出血所致脑损伤的保护作用
　　 目的：探讨早期使用CD34单克隆抗体能否减轻SAH所致的颞叶脑皮层及海马神经元的凋亡，从而对缺血的脑组织起一定的保护作用。
　　 方法：30只健康成年SD大鼠随机分成对照组，SAH组，安慰剂组，CD34单克隆抗体低剂量治疗组（LD）和CD34单克隆抗体高剂量治疗组（HD）5个组。应用枕大池一次注血法制成SAH动物模型，治疗组在注血前经枕大池注入CD34单克隆抗体，分为10μg/10μl（LD组）和20μg/10μl（HD组）两个不同剂量组，而安慰剂组注血前仅注射等量生理盐水（NS）。用免疫组化检测各组颞叶皮层及海马神经元Caspase-3表达。
　　 结果：对照组中Caspase-3表达不明显，SAH组及安慰剂组颞叶皮层及海马区神经元Caspase-3表达明显上调，和对照组比较具统计学意义（P<0.01），Caspase-3主要表达于神经元胞浆中，可见胞浆深染。LD组各层的染色较SAH组减弱，为轻度或中度染色，和安慰剂组相比具统计学意义（P<0.05），HD组Caspase-3染色不明显，和安慰剂组相比具显著性差异（P<0.01）。HD组与LD组相比，阳性率也具差异（P<0.05）。
　　 结论：CD34单克隆抗体对SAH所致的脑损伤有一定的保护作用，其作用机制可能通过抑制神经元的凋亡而对脑组织起到保护作用。