大鼠阴茎海绵体干细胞的分离培养及鉴定

摘要

目的:对大鼠阴茎海绵体细胞进行初步分离培养,检测干细胞标志物干细胞抗原-1(Sca-1)、Oct4和肌源性标志物结蛋白(Desmin)的表达,探索阴茎海绵体中是否存在内源性干细胞及肌源性干细胞。
　　 方法:取2月龄SD大鼠,重量200～250g,乙醚吸入麻醉后,无菌条件下取阴茎海绵体组织,用Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶消化分离组织,待细胞基本以单细胞形态存在时,过滤、离心收集细胞沉淀,用含20％胎牛血清的DMEM重悬培养。采用改良的Preplate差速贴壁技术对细胞进行初步分离培养,所获PP1-PP6贴壁细胞,应用流式细胞仪、免疫荧光细胞化学法、western blot检测观察分离细胞中Sca-1、Oct4及Desmin的表达,同时行Sca-1/Oct4、Sca-1/Desmin、Oct4/Desmin免疫荧光双标记。
　　 结果:分离培养所获PP1和PP2细胞贴壁快,主要是长梭形的成纤维样细胞,PP3-PP5细胞贴壁能力逐渐减慢,出现短梭形细胞,有的呈多角形,以血管内皮细胞、平滑肌细胞为主,PP6细胞中有体积较小,成圆形的漂浮细胞,这种细胞贴壁很慢,2-3天后开始贴壁成圆形或梭形。流式细胞仪检测:PP3细胞中Sca-1、Oct4阳性表达量分别为0.3％±0.2％、0.2e％±0.3％,与同型对照组相比均无统计学差异(p>0.05),Desmin阳性表达量为15.3％±1.5％,与同型对照组相比有统计学差异(p<0.05)；PP6细胞中Sca-1、Oct4、Desmin阳性表达量分别为5.7％±0.7％、2.6％±0.3％、41.1％±1.6％,与PP3相比均有统计学差异(p<0.05)。免疫荧光细胞化学显示在PP6中有少量细胞分别表达Sca-1和Oct4,均散在分布,Sca-1以胞浆表达为主,Oct4则表达于胞核；表达Desmin细胞聚集,数量较多,主要表达于胞浆；亦发现有极少量双阳性标记细胞(Sca-1/Oct4、Sca-1/Desmin和Oct4/Desmin),Sca-1/Oct4表达于同一细胞的胞浆及胞核,Sca-1/Desmin表达于同一细胞的胞浆,Oct4/Desmin则表达于同一细胞的胞核及胞浆。Western blot显示.PP1-PP5细胞中未检测到Sca-1及Oct4蛋白明显表达,但在PP6细胞中则检测到Sca-1及Oct4蛋白的表达,Desmin蛋白在PP1-PP6细胞中表达逐渐增强。
　　 结论:在大鼠阴茎海绵体中发现具有干细胞及肌源性干细胞表型的细胞,提示阴茎海绵体中存在内源性干细胞及肌源性干细胞。