致弱日本血吸虫尾蚴诱导小鼠免疫保护机制研究

摘要

血吸虫病是世界上威胁着约2 亿人口健康的一大重要寄生虫病。尽管化疗在我国实施过程中起到了很好作用，却面临着再感染及抗药性等问题。研制发展血吸虫病疫苗是理想的防治方法。随着分子生物学技术的发展与应用，有关血吸虫病疫苗候选抗原的研究有了重大进展，其中WHO 所挑选的六种抗原即Sm97、GST、rIrVs、Sm23、TPI和Sm14 已在指定独立实验室的深入研究发现这6种最具希望的血吸虫候选抗原分子，在小鼠均不能稳定获得40％以上的保护力，因而这些抗原可能并不是合适的疫苗分子。
　　 血吸虫病疫苗发展的另一条替代途径和策略是诱导自然感染状态下并不正常出现的免疫应答，以期产生高水平的保护力。研究表明，致弱血吸虫尾蚴疫苗是所有用于研究血吸虫疫苗中保护力最强的，而致弱尾蚴是在入侵早期即局部皮肤、皮肤淋巴结和肺部引起免疫应答强有力的刺激因子并诱导了保护性免疫。一般认为，在血吸虫感染人体的整个过程中，宿主免疫应答发展至少经历3个变化的时相，于感染后最初的3 ～5周，宿主暴露在移行中的未成熟童虫刺激中，呈现Th1优势应答，至第5 ～6周，当成虫开始产卵时，Th1 应答降低，并呈现Th2 优势应答，在随后感染进入慢性期，Th2 应答受到明显调节；辐照致弱尾蚴进入体内后，不能发育为成虫并产卵，在此过程中，致弱尾蚴虫体的形态结构、发育、生物学行为（移行速度）以及抗原成分与正常尾蚴相比，均发生明显的改变：尾蚴口腹吸盘肿胀；体部收缩；尾端呈皱褶状变化；神经肌肉的协调性破坏，在皮下滞留的时间延长，其体内的移行被“截”短，一部分停留在皮肤，其余的最远可移行至肺。致弱尾蚴在移行至主要免疫系统之前，例如脾、胸腺等前需要在体内移行一段距离，其保护性反应主要从皮肤、引流淋巴结到肺引起的各种效应反应的综合结果，这三个部位引起的多方面免疫反应,包括从Th1 有关的细胞调节活动到Th2 涉及的抗体应答对保护力至关重要。加大辐照剂量后致使仅局限皮肤期移行的致弱尾蚴并不能有效的诱导免疫保护作用，故致弱童虫在肺期的移行对诱导有效的免疫效显得更为重要。最近研究比较UV 辐照致弱曼氏血吸虫尾蚴与Sm23(曼氏血吸虫膜蛋白）诱导小鼠（C57BL/6）产生的保护力及其免疫应答的异同，两组的保护力分别为60％和45％，明显的不同出现在肺期炎症应答，致弱尾蚴免疫组肺期炎症反应明显，单核细胞聚集在炎症灶附近，并与移行的童虫相关。以上结果亦显示，肺可能是产生高保护性免疫应答的重要部位。
　　 树突状细胞（Dentric cell，DC）是目前已知的功能最强的抗原递呈细胞(antigenpresenting cell,APC)，在先天性、获得性免疫间起着较好的桥梁作用。CD11c分子是分子量150kD的αX亚单位β2 整合素家族成员，是目前被广泛应用的树突状细胞的特异性标记物，也是是dC成熟重要的表面标记之一，其表达强度能部分代表局部组织中DC的聚集。T 细胞是免疫应答的中心环节，针对非己物质的排异反应强度主要由其所引发的机体免疫系统激活程度决定。T 细胞活化程度是判别机体免疫功能状态的重要指标。CD25分子量gp55kD，又名IL-2R α，组成高亲和力IL-2受体，促进T 细胞的生长，是活化T 细胞表达的重要标志性分子，检测该分子表达则可反映T 细胞活化情况[7]。本研究在建立紫外线辐照致弱日本血吸虫尾蚴免疫BALB/c小鼠模型基础上，着眼于免疫小鼠早期免疫应答阶段——致弱尾蚴感染小鼠后在肺部滞留引起的免疫病理改变及其诱导可能免疫保护机制研究，对脾、肺组织细胞树突状细胞表面分子CD11c的表达与T 细胞激活程度等应答特征分析，研究对致弱尾蚴免疫小鼠模型中起决定性作用的肺期童虫诱导的肺组织免疫病理反应及其所诱导的T 细胞在脾等免疫器官与外周血中免疫应答特征。此外，本实验延长观察时间到致弱尾蚴免疫小鼠攻击感染6 ～8w后肝肉芽肿形成期CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞在正常感染小鼠和免疫后攻击感染小鼠中表达差异，分析其诱导的免疫应答特征及其可能机制，从而对目前公认可诱导最高免疫保护作用疫苗——辐照致弱尾蚴诱导免疫应答规律，为血吸虫病防治提供借鉴。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

研究背景

第一部分 紫外线致弱日本血吸虫尾蚴诱导BALB/c小鼠免疫保护作用研究

第二部分 紫外线致弱日本血吸虫尾蚴感染小鼠引起的肺组织细胞反应及虫体扫描电镜观察

第三部分 减毒日本血吸虫尾蚴免疫BALB/c小鼠血清IgG水平动态及其被动转移保护力研究

第四部分 紫外线致弱日本血吸虫尾蚴诱导BALB/c小鼠早期免疫应答动态变化的研究

第五部分 Treg 细胞在紫外线致弱日本血吸虫尾蚴免疫BALB/c小鼠体内动态表达研究

全文总结

本研究受基金资助情况

攻读学位期间公开发表的论文

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