电离辐射和紫杉醇诱导的多核细胞形成中SPATA5L1、Cyclin B2表达的变化

摘要

背景及目的:电离辐射与紫杉醇协同作用,可以诱导体外培养的人口腔上皮癌KB细胞产生G2／M期阻滞,形成多核细胞,并最终造成死亡。先前通过基因芯片筛选研究发现在经过电离辐射和／或紫杉醇作用后,有10条与细胞分裂有关的基因存在差异表达。本研究旨在通过Real-time PCR和Western Blot定量分析其中两条基因 SPATA5L1、Cyclin B2的表达变化来揭示G2／M期阻滞及多核细胞形成的分子机制。
　　 方法:不同剂量60Coγ射线照射联合不同浓度紫杉醇作用于KB细胞,用以下实验观察受照细胞的变化:(1)倒置显微镜观察细胞形态学的变化,细胞克隆形成实验检测细胞增殖抑制效应；(2)利用Real-time PCR技术检测SPATA5L1基因表达随照射剂量和药物浓度变化的情况:(3)Western Blot实验检测电离辐射联合紫杉醇对KB细胞内 SPATA5L1、Cyclin B2蛋白含量的影响。
　　 结果:(1)电离辐射和紫杉醇协同作用能显著抑制KB细胞的生长增殖,且这种协同效应是照射剂量和药物浓度依赖性的；(2)KB细胞经电离辐射、紫杉醇或两者联合作用后,形成大量多核细胞,并最终死亡；(3)Real-time PCR结果表明,KB细胞受到不同剂量照射、40nmol／L紫杉醇和两者联合作用后SPATA5L1的表达明显上调；(4)Western Blot检测结果表明,KB细胞在受到6Gy以下不同剂量的电离辐射或电离辐射与40 nmol／L紫杉醇协同作用后,SPATA5L1的表达量明显增加,但同时Cyclin B2的表达量则下降。
　　 结论:多核细胞形成是电离辐射与紫杉醇协同作用诱导KB细胞生长增殖抑制的主要原因之一。可能的分子机制是细胞有丝分裂相关蛋白 SPATA5L1上调表达和Cyclin B2适度的下调表达。Cyclin B2的下调表达导致有丝分裂纺锤体形成抑制,而 SPATA5L1上调表达可能干扰细胞收缩环的功能。最终结果是在细胞分裂的过程中,细胞核分裂后细胞质的分裂被阻止,形成多核细胞,并最终造成死亡。