IDO基因修饰的小鼠骨髓间充质干细胞诱导免疫耐受的体外实验研究

摘要

目的：研究吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)基因修饰的小鼠骨髓间充质干细胞(IDO-BMSC)体外诱导免疫耐受作用，并探讨其相关的免疫学机制。
　　 方法：C57BL/6小鼠的BMSC与BALB/C小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)和脾脏单个核细胞(Splenic mononuclear cells，SMC)在体外按不同细胞比例共同培养4天。根据BMSC中IDO基因修饰与否，将实验分为对照组和基因修饰组，对照组和基因修饰组均设：A组：BMSC与DC共同培养(1∶1)，B组：BMSC与SMC共同培养(1∶4)，C组：BMSC与SMC共同培养(1∶8)，D组：BMSC与SMC共同培养(1∶16)，E组：BMSC与DC、SMC共同培养(BMSC∶SMC=1∶4)，F组：BMSC与DC、SMC共同培养(BMSC:SMC=1：8)，G组：BMSC与DC、SMC共同培养(BMSC：SMC=1：16)，培养体系中均加入(1ug/ml)的脂多糖(LPS)。流式细胞术分析共培养前后树突状细胞表面分子表型变化及脾脏单个核细胞中FoxP3+Treg含量。微量样本多指标流式蛋白定量技术(CBA)检测共培养上清中IL-2，IL-4，IL-6，IFN-γ，IL-17，IL-10的浓度。高效液相(HPLC)法检测上清中色氨酸及犬尿氨酸浓度。RT-PCR检测A、E组DC中IDOmRNA的表达。
　　 结果：(1)BMSC与DC细胞以1：1的比例共培养(A组)，对照组DC与未成熟DC表型相似，而基因修饰组较对照组能明显抑制DC成熟(P＜0.05)，有统计学意义。(2)B、C、D组中FoxP3+Treg含量比较，基因修饰组FoxP3+Treg高于对照组(P＜0.05)，有统计学意义；E、F、G组中FoxP3+Treg含量增加，基因修饰组高于对照组，P＜0.05，有统计学意义。(3)组间比较B、C、D组，基因修饰组较对照组IL-2，IL-6，IFN-γ，IL-17明显下降，而IL-4及IL-10明显上升，P＜0.05，有统计学意义。组间比较E、F、G组，基因修饰组IL-2，IL-6明显下降，而IL-4，IFN-γ明显升高，P＜0.05，有统计学意义，IL-17，IL-10改变不明显，P＞0.05，无统计学意义。(4)基因修饰组IDO活性明显高于对照组，P＜0.05。且在基因修饰组，E组IDO活性明显高于A组，P＜0.05，有统计学意义。(5)基因修饰的E组中的DC中检测出IDOmRNA的表达，对照组无IDOmRNA的表达。
　　 结论：IDO基因修饰的骨髓间充质干细胞能通过以下四条途径诱导免疫耐受：1、IDO-BMSC能够显著抑制DC细胞的成熟，2、IDO-BMSC可以诱导FoxP3+Treg含量增加,3、IDO-BMSC能够促进抗炎因子，抑制促炎因子的分泌,4、IDO-BMSC通过SMC的桥梁作用诱导DC细胞产生IDO，进而诱导免疫耐受。

目录

声明

前言

材料和方法

一、材料

二、实验方法

结果

讨论

结论

参考文献

附图

综述

缩略词表

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