非小细胞肺癌中FasL、Caspase-8蛋白的表达及Caspase-8基因甲基化的相关性研究

摘要

背景与目的：
　　 恶性肿瘤的发展变化在某种程度上取决于肿瘤与免疫系统之间的相互作用。恶性肿瘤之所以能够无限制的生长、易发生远处转移，除了与其本身的特征有关外，更重要的是与肿瘤细胞逃脱宿主的免疫监视密切相关。研究发现细胞凋亡主要有线粒体和死亡受体两条途径。FasL是重要凋亡分子，与死亡受体Fas结合后诱导细胞膜表面Fas分子聚集形成三聚体启动细胞凋亡的信号传递诱导Fas阳性细胞凋亡。有研究发现，多种肿瘤细胞的FasL表达水平往往升高，促使其杀死与之接触的免疫活性细胞，两者协同通过营造局部免疫赦免使肿瘤细胞逃脱机体的免疫监视，共同参与肿瘤的免疫逃逸。Caspase家族是执行凋亡的主要酶类，Caspase-8作为Caspase酶系级联反应中的启动子发挥着重要的作用。有研究表明，DNA甲基化机制参与了肿瘤的发生，其启动子区5’CpG岛甲基化后不仅使基因沉寂，而且会增加基因的缺失率和突变率，其改变了蛋白和DNA的相互作用，导致染色体结构的改变，降低基因的转录。现已发现Caspase-8在许多肿瘤组织中低表达或不表达，包括神经母细胞瘤、头颈部肿瘤、宫颈癌、膀胱癌、结直肠癌、胃癌及食管癌等，但Caspase-8与肺癌的关系及其甲基化的表达研究却很少。本实验通过观察人非小细胞肺癌不同组织、不同类型及转移淋巴结中FasL、Caspase-8蛋白的表达情况及Caspase-8基因甲基化状态。研究FasL、Caspase-8蛋白的表达与Caspase-8基因甲基化状态的相关性。探讨FasL、Caspase-8蛋白的表达及Caspase-8基因的甲基化状态在非小细胞肺癌发生发展中的作用及其临床意义。从而为非小细胞肺癌的综合性治疗提供有力的途径和可靠的依据。
　　 实验资料和方法：
　　 1．本实验收集苏州大学附属第一医院胸外科2010年3月至2011年3月间就诊手术切除的非小细胞肺癌组织及癌旁组织（距肿瘤5cm以内肺组织）各80例，其中男性患者56例，女性患者24例，年龄为40-78岁，平均年龄为58.6±10.5岁。其中肺鳞癌45例，肺腺癌24例，肺腺鳞癌11例。低分化癌38例，中分化癌25例，高分化癌17例。临床分期：依据1997年国际抗癌联盟(UICC)TNM分期标准，Ⅰ期16例，Ⅱ期29例，Ⅲ期35例。伴有区域淋巴结转移46例，非区域淋巴结转移34例。同时取正常肺组织（距肿瘤组织5cm以外）标本52例作为对照。
　　 2．采用免疫组化S-P染色方法检测非小细胞肺癌患者中FasL、Caspase-8蛋白表达情况。
　　 3．经亚硫酸化修饰，甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation-specific polymerase chain reaction，MS-PCR)方法检测非小细胞肺癌患者中Caspase-8基因甲基化状态。
　　 4．所得结果采用SPSS 13.0进行相应的统计学分析。
　　 实验结果：
　　 1．非小细胞肺癌中FasL表达结果：FasL蛋白在本组80例肿瘤标本中存在不同程度的阳性表达，FasL蛋白主要分布于肿瘤细胞的胞浆，少部分分布于细胞膜表面，阳性表达率明显高于癌旁组织及正常组织，P＜0.05；FasL在肺腺癌阳性表达率明显高于在鳞癌的阳性表达率及腺鳞癌阳性表达率，P＜0.05;FasL蛋白在低分化癌中的表达明显高于中、高分化癌，有显著差别，P＜0.05；转移淋巴结FasL蛋白阳性率高于非转移淋巴结组阳性率，P＜0.05;FasL蛋白在不同TNM分期中表达差别不显著(P＞0.05)。而且，非小细胞肺癌与肿瘤部位、年龄及性别之间的关系，无明显差异，无统计学意义(P＞0.05)。
　　 2.非小细胞肺癌Caspase-8蛋白表达结果：Caspase-8蛋白则分布在细胞的胞浆内,阳性表达率明显低于癌旁组织及正常组织，P＜O.O1;在肺腺癌中的表达阳性率显著低于肺鳞状细胞癌阳性率及腺鳞癌阳性率，P＜0.05;Caspase-8蛋白表达在高分化癌阳性率高于中、低分化癌，存在显著差异(P＜0.05)；转移淋巴组中Caspase-8蛋白表达阳性率低于非转移淋巴结组中阳性表达率，两组差异有统计学意义(P＜0.05)；同样，Caspase-8蛋白在非小细胞肺癌中不同TNM分期、肿瘤部位、年龄及性别的表达，无统计学意义(P＞0.05)。
　　 3．非小细胞肺癌Caspase-8基因甲基化表达结果：癌组织Caspase-8基因甲基化率明显高于癌旁组织及正常肺组织，P＜O.01；Caspase-8基因甲基化在肺腺癌中的表达水平显著高于肺鳞状细胞癌及腺鳞癌，P＜0.05;转移淋巴结Caspase-8基因甲基化阳性率高于非转移淋巴结阳性率，两组间比较，P＜0.05;Caspase-8基因甲基化在不同分化程度及TNM分期的肺癌中表达差别不显著，与肿瘤部位、年龄及性别之间无明显差异，无统计学意义(P＞0.05)。
　　 4．非小细胞肺癌中Caspase-8基因甲基化状态与Caspase-8蛋白的表达的结果：43例Caspase-8基因甲基化阳性的非小细胞肺癌中，有11例Caspase-8蛋白表达阳性；37例Caspase-8基因甲基化表达阴性的肺癌患者中，有19例Caspase18蛋白表达阴性。经X2检验相关分析，Caspase-8基因甲基化与Caspase-8蛋白表达呈负相关(r=-0.239，P＜0.05)。
　　 结论：
　　 1．非小细胞肺癌中存在显著的FasL蛋白表达升高和显著的Caspase-8基因高甲基化表现，可以使肺癌细胞协助肿瘤细胞反杀伤免疫活性细胞，使肿瘤局部形成一个免疫特赦部位并有利于肿瘤的发展和转移；并可能成为腺癌较易发生早期转移的重要原因。
　　 2．非小细胞肺癌组织中存在显著的Caspase-8蛋白表达降低，Caspase-8在鳞癌中表达升高，成为鳞癌预后较腺癌好的原因；并可能成为判断非小细胞肺癌预后的一个重要指标。
　　 3．非小细胞肺癌中Caspase-8蛋白表达下调与其基因启动子区5’CpG岛发生高甲基化呈负相关。

目录

声明

前言

第一部分 非小细胞肺癌组织中FasL、Caspase-8蛋白的表达

实验材料和方法

结果

讨论

结论

第二部分 非小细胞肺癌中Caspase-8基因异常甲基化的研究

实验材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述

英文缩写索引

攻读学位期间公开发表的论文

致谢