人工合成E-选择素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织一氧化氮合酶表达的影响及其机制探讨

摘要

第一部分：人工合成E-选择素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响
　　目的：通过改良Zea Longa线栓法建立局灶性脑缺血再灌注损伤模型，应用人工合成E-选择素对SD(Sprague-Dawley)大鼠进行干预，研究其对大鼠脑缺血再灌注损伤后的脑梗死体积、脑组织含水量及显微结构的影响。
　　方法：36只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和人工合成E-选择素治疗组，每组12只。通过改良Zea Longa线栓法，即：采用颈部旁正中切口，皮片保护迷走神经，运用多聚-L-赖氨酸包被头端的栓线等，建立SD大鼠脑缺血再灌注损伤模型。通过神经行为学评分、TTC染色、干湿比重法、光镜及电镜观察病理切片等方法，进一步了解人工合成E-选择素对脑缺血再灌注损伤的干预作用。
　　结果：Zea Longa线栓法模型部分改良后模型制作成功率为88%。缺血区的脑组织经 TTC染色后呈苍白色，对照组无梗死灶，治疗组大鼠脑梗死体积为234±17 mm3，较模型组286±21mm3减少(P<0.05)。对照组脑组织含水量79.02±0.75%；模型组82.06±0.84%；治疗组脑组织含水量80.30±0.65%。病理结果提示对照组脑缺血区神经元无损伤表现，模型组缺血区脑组织神经细胞有胞浆水肿、细胞器缺乏、核质深染固缩等不同程度缺血性改变，治疗组较模型组神经细胞损伤现象明显减少。
　　结论：改良后的Zea Longa线栓法模型制作更简便，稳定性更好，模型成功率更高。通过人工合成E-选择素对SD大鼠进行干预能够明显减少脑梗死体积及脑组织含水量，并通过病理切片的观察结果，进一步证实人工合成 E-选择素的对脑组织的保护作用。
　　第二部分：人工合成E-选择素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织一氧化氮合酶及血清一氧化氮含量表达的影响
　　目的：探讨人工合成E-选择素对大鼠局部脑缺血再灌注损伤中脑组织一氧化氮合酶（NOS）及血清中一氧化氮(NO)含量表达的影响及其作用机制。
　　方法：采用改良的Zea Longa线栓法建立SD大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，将90只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和人工合成E-选择素治疗组，每组30只。各组大鼠在脑缺血2h再灌注2h、6h、12h、24h、72h，5个时间点分别提取血清标本和脑组织标本。采用硝酸盐还原法测定血清中一氧化氮含量和免疫组化法检测缺血区脑组织神经型一氧化氮合酶（nNOS）、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)阳性细胞数。数据采集后应用 SPSS13.0分析软件进行统计分析。
　　结果：1. NO结果（1）对照组NO变化无统计学意义。（2）模型组脑缺血2h再灌注2h~24h区间NO含量呈上升趋势，24h时达到高峰，72h已有所降低但仍高于对照组，各时间点与对照组比较明显增高(P<0.01)。(3)治疗组血清中NO含量变化趋势同模型组，数据统计结果较模型组减少(P<0.05)，较对照组增多(P<0.01)。
　　2. NOS结果（1）对照组nNOS、iNOS阳性细胞数变化无统计学意义。（2）模型组nNOS阳性细胞在脑缺血2h再灌注2h后开始表达，12h达到高峰，24h开始降低，各时间点与对照组比较明显增高(P<0.01)；模型组iNOS阳性细胞在脑缺血2h再灌注2h开始出现，并持续增多，随着时间延长呈上升趋势，在24h达到高峰，72h出现下降，各时间点与对照组比较明显增多(P<0.01)。（3）治疗组各时间点nNOS、iNOS阳性细胞数变化趋势同模型组，但较模型组阳性细胞数减少(P<0.05)，较对照组阳性细胞数增多(P<0.01)。
　　结论：1．大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织NOS活性表达增多，释放出高浓度NO,导致脑组织损伤。2．人工合成E-选择素通过降低NOS的表达，减少NO释放，减轻炎症反应，减少脑缺血再灌注损伤，起到脑保护作用。

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引言

第一部分：人工合成E-选择素对脑缺血再灌注损伤的保护作用

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分 人工合成E-选择素对脑缺血再灌注损伤一氧化氮合酶及血清一氧化氮表达的影响

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

附录

综述

参考文献

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