生命早期抗生素使用对Th1/Th2平衡影响的实验研究

摘要

第一部分生命早期抗生素使用对大鼠Th1/Th2类因子表达的影响
　　目的：
　　观察生命早期不同日龄大鼠抗生素使用对Th1/Th2类因子表达的影响。
　　方法：
　　24只新生SD大鼠，随机分为生后2天抗生素组（2dCef）、7天抗生素组（7dCef）、对照组，每组8只大鼠。分别于生后第2天，生后第7天腹腔注射头孢噻肟钠（Cefotaxime Sodium）连续3天，对照组注射等量的PBS。观察大鼠注射抗生素前后的体重变化及整体状态，生后第35天处死，进行肺泡灌洗液（BALF）细胞分类计数，病理学检测观察肺组织细胞浸润。双抗夹心免疫酶联吸附试验（ELISA）法测定BALF中及血清中IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-5表达。实时荧光定量PCR检测肺组织中IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-5的mRNA相对表达量。流式细胞技术检测脾细胞CD4+IFN-γ+Th1细胞、CD4+IL-4+Th2细胞表达。
　　结果：
　　1.腹腔注射抗生素3天后，大鼠出现：精神萎靡，大便水样，次数增多表现，尤其2dCef组表现明显。2dCef组和7dCef组大鼠体重生长缓慢，腹腔注射3天后的体重与对照组相比有显著性差异（P<0.05）。
　　2.各组大鼠肺组织病理切片无明显不同，肺组织基本无炎性改变，肺泡内无渗出，间隔无明显增厚，血管周围无明显炎症细胞浸润。
　　3.BALF中2dCef组的细胞总数，中性粒细胞（Neu），淋巴细胞(Lym)表达均显著高于对照组（P<0.05），而7dCef组则无显著性差异（P>0.05）。三组大鼠BALF中均未见嗜酸性粒细胞、巨噬细胞。
　　4.Th1类因子：IL-12在BALF、血清及肺脏mRNA水平表达，2dCef组和7dCef组的均低于对照组（P<0.05）、2dCef组较7dCef组下降更显著（P<0.05）；IFN-γ在BLAF中，2dCef组和7dCef组的均显著低于对照组（P<0.05）、2dCef组较7dCef组下降更显著（P<0.05），血清、肺脏mRNA水平的表达三组间差异无统计学意义（P>0.05）。Th2类因子：IL-4在BALF、血清、肺脏mRNA水平的表达，2dCef组和7dCef组的均显著高于对照组（P<0.05）、2dCef组较7dCef组上升更显著（P<0.05）；IL-5在BALF、血清及肺脏mRNA水平的表达三组间无显著性差异（P>0.05）。
　　5.脾细胞中CD4+IFN-γ+Th1细胞表达及CD4+IL-4+Th2细胞表达三组差异无统计学意义（P>0.05）。
　　结论：
　　1.生命早期抗生素使用可影响幼年大鼠的肠道功能和生长发育。
　　2.生命早期抗生素使用（2dCef组）可使BALF中炎性细胞数量增多，但并未出现以嗜酸性粒细胞和淋巴细胞浸润为主肺组织反应性炎症。
　　3.生命早期抗生素使用可使Th1类因子IL-12表达下降，Th2类因子IL-4表达上升，且以2dCef组为显著。
　　第二部分生命早期抗生素使用对致敏大鼠Th1/Th2类因子表达的影响
　　目的：
　　观察在生命早期抗生素使用对日后变应原致敏大鼠Th1/Th2类因子的表达的影响。
　　方法：
　　24只新生SD大鼠，随机分为2天抗生素致敏组（2dCef+OVA组）、7天抗生素致敏组（7dCef+OVA组）、单纯致敏组（OVA组），每组8只大鼠，注射抗生素，实验方法同第一部分，在生后第21天，第28天的用卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏。
　　结果：
　　1.BALF中2dCef+OVA组的细胞总数，中性粒细胞（Neu）表达，淋巴细胞(Lym)表达均显著高于OVA组（P<0.05），而7dCef+OVA组与OVA组比较则无显著性差异（P>0.05）。
　　2.各组大鼠肺组织病理切片无炎性改变。
　　3.Th1类因子：IL-12在BALF、血清及肺脏mRNA水平表达，2dCef+OVA组和7dCef+OVA组的均低于OVA组（P<0.05）、2dCef+OVA组较7dCef+OVA组下降更显著（P<0.05）；IFN-γ在BLAF、血清中及肺脏mRNA的相对表达量3组间差异无统计学意义（P>0.05）。Th2类因子：IL-4在BALF、血清及肺脏mRNA水平表达，2dCef+OVA组和7dCef+OVA组的均显著高于OVA组（P<0.05）、2dCef+OVA组较7dCef+OVA组上升更显著（P<0.05）；IL-5在BALF、血清及肺脏mRNA水平的表达3组间无显著性差异（P>0.05）。
　　4.脾细胞中CD4+IFN-γ+Th1细胞表达及CD4+IL-4+Th2细胞表达3组差异无统计学意义（P>0.05）。
　　结论：
　　综合第一部分结果，生命早期抗生素使用，在日后予以过敏原（OVA）致敏大鼠模型中，并不能使Th1/Th2失衡进一步加重。

目录

封面

中文摘要

英文摘要

目录

第一部分 生命早期抗生素使用对大鼠体内Th1/Th2类因子表达的影响

引言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 生命早期抗生素的使用对致敏大鼠 Th1/Th2类因子表达的影响

引言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

综述

参考文献

中英文缩略词汇表

攻读学位期间公开发表的论文

致谢