原代培养人肺癌相关成纤维细胞对肺癌细胞系放射敏感性影响研究

摘要

目的:
　　探讨在体外原代培养人肺癌相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblasts,CAF)和肺癌细胞系(A549、H1299)直接接触共培养条件下,与肺癌细胞系(A549、H1299)单独培养条件下放射敏感性的差异,从而研究影响肺癌细胞放射敏感性的可能因素。
　　方法:
　　选择人肺癌A549、H1299细胞系,采用人肺癌组织进行原代培养后获取人肺CAF,采用免疫荧光技术鉴定。CAF与肺癌细胞系 A549、H1299进行直接接触共培养,及肺癌细胞系A549、H1299进行单独培养,采用细胞克隆形成实验观察CAF对肺癌细胞系放射敏感性的影响。
　　结果:
　　新鲜人肺腺癌经组织块贴壁法原代培养出可稳定传代的CAF,免疫荧光技术鉴定其特异表达α-平滑肌肌动蛋白、波行蛋白和成纤维细胞活化蛋白,而无细胞角质蛋白-18表达。人肺CAF分别与A549、H1299细胞共培养组在接受不同剂量梯度(0、2、4、6、8Gy)照射后的克隆形成率均高于单独组。在0Gy照射时单独组和共培养组 A549细胞的克隆形成率分别为(20.0±3.9)％和(32.3±5.5)％(P<0.05),H1299细胞的分别为(20.6±3.1)％和(35.2±2.3)％(P<0.05)。在2Gy照射时,A549细胞单独培养组和 A549细胞与 CAF共培养组的存活分数(SF2)及 H1299细胞单独培养组和 H1299细胞与CAF共培养组的存活分数(SF2)均无明显差异,单独组和共培养组A549细胞的SF2分别为0.727±0.061和0.782±0.089(P>0.05),H1299细胞分别为0.692±0.065和0.782±0.037(P>0.05);A549细胞与CAF共培养组和H1299细胞与CAF共培养组,在X线照射时,CAF对A549、H1299细胞均有放射保护作用,人肺 CAF对A549、H1299细胞的放射保护增益比分别为1.29和1.25。
　　结论:
　　人肺CAF与肺癌细胞系直接接触共培养后放射敏感性低于肺癌细胞系单独培养原因可能为CAF促进了肿瘤细胞增殖,这可能是影响人肺癌细胞放射敏感性的一个因素。

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引言

材料与方法

1 实验材料和试剂

2 实验器材：

3 技术路线图

4 实验方法

5 数据处理与统计分析：

结果

1 细胞株的选择

2 人肺CAF成功培养和鉴定

3 A549、H1299细胞与人肺CAF共培养时克隆形成鉴定：

4 单独组和共培养组之间放射敏感性差异：

讨论

结论

参考文献

附图

附录

讨论

参考文献

综述：癌相关成纤维细胞对肿瘤细胞放射敏感性影响的研究现状

参考文献

攻读学位期间公开发表的论文

致谢