Galectin-3沉默对胃癌细胞SGC-7901生长及化疗敏感性影响的实验研究

摘要

目的:初步探讨siRNA沉默胃癌细胞SGC-7901中Galectin-3的表达后,细胞增殖、凋亡及对奥沙利铂化疗敏感性的变化。
　　方法:根据Genbank中Galectin-3的编码区基因序列NM-002306及相关参考文献,合成特异性针对Galectin-3的siRNA及与Galectin-3无关的阴性对照siRNA,瞬时转染胃癌细胞SGC-7901;实验分为4组:空白对照组、空脂质体组、阴性siRNA组及Galectin-3 siRNA组;利用Real time PCR技术测定转染后24h各组细胞Galectin-3在mRNA水平上的相对表达量;Western blot技术检测转染后72h各组细胞Galectin-3在蛋白水平上的相对表达量;CCK-8法测定各组细胞在转染后24h、48h、72h的A值,根据公式(1-实验组A值/空白对照组A值)*100％计算细胞增殖抑制率;AnnexinⅤ/PI染色,流式细胞仪检测转染72h后各组细胞凋亡率;细胞转染后,加入不同浓度的奥沙利铂(5、10、20、40、80ug/ml)培养48h,CCK-8法观察各组细胞的细胞增殖抑制率。
　　结果:用荧光标记的siRNA转染24h后,采用流式细胞仪检测转染效率,结果为83.8％,符合后续实验要求;以△Ct值表达各实验组Galectin-3在mRNA水平的相对表达量,结果显示Galectin-3 siRNA组表达量较空白对照组降低了87.8％(P<0.05),以Galectin-3与内参的灰度值比值表达Galectin-3在蛋白水平的表达量,结果显示Galectin-3 siRNA组表达量较空白对照组降低了90.4％(P<0.05),而空脂质体组、阴性siRNA组与空白对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05),证明通过转染siRNA成功抑制Galectin-3在mRNA及蛋白水平的表达;转染后24h、48h和72h,Galectin-3 siRNA组细胞增殖抑制率分别为(15.57±1.45)％、(32.90±0.76)％、(57.35±1.05)％,与其余对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);转染72h后,细胞凋亡率空白对照组为(21.87±1.36)％,空脂质体组为(24.67±1.40)％,阴性siRNA组为(27.73±2.55)％, Galectin-3 siRNA组细胞凋亡率为(46.17±2.39)％,明显高于其余3个对照组,差异有统计学意义(P<0.05);单用不同浓度(5、10、20、40、80ug/ml)奥沙利铂处理的空白对照组,48h的细胞抑制率分别为(13.30±0.21)％、(26.82±0.55)％、(34.72±0.47)％、(41.32±0.05)％、(50.28±0.13)％,而用Galectin-3 siRNA与奥沙利铂同时处理后,48h细胞抑制率显著提高,分别为(19.94±0.61)％、(40.04±0.14)％、(62.04±0.13)％、(81.13±0.68)％、(90.59±0.68)％,差异有统计学意义(P<0.05)。而其余各对照组之间,差异无统计学意义(P>0.05)。说明转染Galectin-3siRNA后, SGC-7901细胞对不同浓度奥沙利铂的化疗敏感性均提高。
　　结论:
　　1.本实验通过转染Galectin-3siRNA成功下调了胃癌细胞SGC-7901中Galectin-3的表达;
　　2.胃癌细胞SGC-7901中Galectin-3的表达下降后,细胞增殖受抑制,凋亡增加;
　　3.抑制胃癌细胞SGC-7901中Galectin-3的表达后,细胞对奥沙利铂的化疗敏感性增加。

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引言

材料与方法

一、胃癌细胞

二、主要试剂

三、主要仪器

四、实验方法

五、统计学处理

结果

一、siRNA转染效率

二、Real time PCR结果

三、Western blot结果

四、细胞增殖结果

五、细胞凋亡结果

六、siRNA干扰Galectin-3后，SGC-7901细胞对奥沙利铂化疗敏感性的改变

讨论

结论

参考文献

附表

综述

攻读学位期间公开发表的论文

缩略词表

致谢