负性共刺激分子Tim3在肿瘤浸润T淋巴细胞表达及调节的初步分析

摘要

目的：在分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血T细胞和组织新鲜标本(癌,癌旁组织)浸润淋巴细胞(TILs)Tim3表达差异的基础上,通过体内外实验探讨T-bet/Eomes是否参与了对Tim3表达的调节,并进一步初步分析肿瘤微环境中Tim3表达的可能影响因素,为深入研究Tim3作为肿瘤免疫治疗的新靶点的可行性提供实验依据。
　　方法：⑴收集手术切除且诊断明确的非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织及癌旁组织,同时采集同一患者外周血,经免疫荧光标记和流式细胞仪分析检测Tim3在在外周血T淋巴细胞和肿瘤浸润T淋巴细胞的表达;⑵采用C57BL/6 WT和T-bet-/-/Eomes-/-DKO小鼠,富集小鼠脾脏T细胞,体外经Th1型分化诱导;同时构建Lewis肺癌模型,分离小鼠脾脏T细胞和肿瘤浸润淋巴细胞,免疫荧光标记和流式细胞术检测Tim3的表达情况,分析T-bet和Eomes是否参与了对Tim3表达的调节;⑶收集人非小细胞肺癌标本(癌组织和癌旁组织),抽提癌组织和癌旁组织RNA,经过逆转录、Real-TimePCR检测IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β、TNF、PD-L1、galectin-9、FoxP3、GATA3、T-bet、Eomes mRNA的相对表达量,初步筛选Tim3表达调节的可能影响分子。
　　结果：①与癌旁正常组织浸润淋巴细胞相比,非小细胞肺癌患者肿瘤组织浸润淋巴细胞(TILs)表面Tim3的表达明显上调;非小细胞肺癌患者外周血T细胞几乎不表达Tim3；②负性共刺激分子 Tim3在非小细胞肺癌肿瘤组织浸润淋巴细胞呈现中度表达和低表达,部分非小细胞肺癌患者肿瘤组织Tim3低表达；③小鼠脾脏T淋巴细胞体外经Th1分化条件培养,T细胞,尤其是CD8+T细胞表面Tim3的表达在T-bet/Eomes双敲基因(DKO)小鼠受到明显抑制；④在小鼠lewis肺癌肿瘤模型中,脾脏淋巴细胞表面Tim3表达也受到T-bet/Eomes的调节,而荷瘤小鼠肿瘤浸润淋巴细胞表面Tim3的表达并不受T-bet/Eomes的调节；⑤肿瘤组织浸润淋巴细胞表面 Tim3中度表达组与 Tim3低表达组相比,Eomes mRNA表达呈现显著升高, TNF-α, IL-1β, IL-10三个因子表达显著降低(p<0.01),而TGF-β、IL-6、T-bet和Gata3等的表达无显著差异；⑥与癌旁组织相比,癌组织中Foxp3,IL-17以及Tim3配体Galectin-9 mRNA表达显著升高,而IL-1β则显著降低(p<0.01)。
　　结论：与癌旁正常组织浸润淋巴细胞相比,非小细胞肺癌患者肿瘤组织浸润淋巴细胞(TILs)表面Tim3的表达明显上调;非小细胞肺癌患者外周血T细胞几乎不表达Tim3;部分非小细胞肺癌患者肿瘤组织Tim3低表达。T-bet/Eomes参与了Tim3在外周免疫器官表达的调节,但Tim3在肿瘤浸润T淋巴细胞的表达可能和肿瘤微环境的诱导有关,Foxp3,IL-17以及Tim3配体Galectin-9 mRNA在肿瘤组织的表达较癌旁组织显著升高,肿瘤组织Tim3中表达组中细胞呈现高耗竭状态,TNF-α, IL-1β,IL-10等炎性因子表达显著降低。

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研究背景

引言

材料与方法

1.实验材料：

2.方法

结果

1. Tim3在非小细胞肺癌患者外周血T淋巴细胞和肿瘤浸润淋巴细胞的表达

2. 负性共刺激分子Tim3在非小细胞肺癌肿瘤组织浸润淋巴细胞的中度表达和低表达

3. T-bet/Eomes调节体外诱导的小鼠Th1细胞表面Tim3的表达

4. 荷瘤小鼠脾脏淋巴细胞表面Tim3的表达受到T-bet/Eomes的调节

5. 荷瘤小鼠肿瘤浸润淋巴细胞表面Tim3的表达不受T-bet/Eomes的调节

6. Tim3在非小细胞肺癌肿瘤浸润淋巴细胞表达调节的初步分析

讨论

总结与展望

参考文献

综述：Tim3在免疫应答中的调节作用

本课题的受资助情况

中英文对照缩略词汇表

致谢