Olanzapine激活AMPK上调自噬减轻Rotenone对多巴胺能神经元的损伤

摘要

目的:研究奥氮平(Olanzapine,OLA)对rotenone诱导多巴胺(dopamine,DA)能神经元损伤的保护作用及其可能的机制。
　　方法:(1)细胞实验:首先检测olanzapine对PC12细胞的毒性作用,采用Western blot检测olanzapine对p-AMPK以及自噬相关蛋白LC3,p62,p70-s6k的影响,免疫荧光染色检测LC3的变化。采用0.5μM rotenone处理PC12细胞24h建立PD细胞模型,治疗组在rotenone给药前24h加入olanzapine(20μM)预处理,实验组以终浓度为2.5μM的AMPK选择性抑制剂compound C预处理PC12细胞3h后再加入olanzapine及rotenone。采用CCK-8法检测细胞活性;Hoechst33258染色法观察细胞核形态变化;Western blot法观察凋亡蛋白PARP及α-synuclein的表达情况。(2)动物实验:雄性Lewis大鼠52只随机分为4组:rotenone注射组的大鼠于颈背部皮下注射 rotenone(1.5mg/kg/day)8周,治疗组在每天灌胃0.9mg/kg olanzapine,八周后观察其行为学变化,处死动物取脑、切片,免疫组化染色观察酪氨酸羟化酶(TH)、LC3及α-synuclein的表达。
　　结果:Western blot结果显示olanzapine能够显著激活AMPK并上调LC3 II的表达,下调p62以及p70-s6k的水平,表明olanzapine能够激活自噬。CCK-8及Hoechst33258结果提示olanzapine能够减轻rotenone诱导的PC12细胞的凋亡,降低由rotenone引起的α-synuclein和PARP的增高。当抑制AMPK以后,自噬的诱导被阻碍并且保护作用消失。体内实验结果显示,olanzapine能够上调大鼠脑内LC3表达。治疗组的大鼠的行为计分显著低于模型组,治疗组的黑质致密部TH阳性细胞数较模型组明显增加,且残存的TH阳性细胞内的α-synuclein显著减少。
　　结论:olanzapine可以减轻rotenone对多巴胺能神经元的损伤,这种保护作用可能是通过激活AMPK通路,上调自噬实现的。

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前言

第一部分 Olanzapine对Rotenone诱导的PC12细胞损伤模型的保护作用及其机制

材料与方法

实验结果

小结

第二部分 Olanzapine对rotenone诱导的PD动物模型的保护作用

材料与方法

实验结果

小结

讨论

结论

参考文献

综述 AMPK调控自噬的研究进展

前言

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文

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