腹股沟皮下注射免疫治疗小鼠变应性鼻炎及治疗前后鼻黏膜microRNA的变化研究

摘要

本文对腹股沟皮下注射免疫治疗小鼠变应性鼻炎及治疗前后鼻黏膜microRNA的变化进行了研究。本研究分为两个部分：
　　第一部分：腹股沟皮下注射法免疫治疗小鼠变应性鼻炎的实验研究。
　　目的：探讨腹股沟皮下注射法免疫治疗小鼠变应性鼻炎的可行性。
　　方法：36只雌性BALB/c小鼠，6～8周龄，随机分为6组，每组6只，包括A空白组、A模型组、A治疗组、B空白组、B模型组和B治疗组（A为腹股沟皮下注射，B为颈背部皮下注射）。卵清蛋白(ovalbumin，OVA)AR模型建立成功后治疗组用OVA进行免疫治疗，隔天一次，共15次。鼻腔连续激发第七天时，进行小鼠AR症状评分，鼻黏膜变色酸2R染色统计鼻黏膜嗜酸性粒细胞(eosinophils，EOS)数，ELISA法检测血清OVA-sIgE表达和鼻腔灌洗液中IL-4和IFN-γ表达，计算IFN-γ与IL-4比值。以SPSS17.0软件进行数据分析。
　　结果：治疗前，模型组和治疗组AR症状评分均大于5，治疗后，A治疗组AR症状评分小于5。A空白组、A模型组、A治疗组、B空白组、B模型组和B治疗组EOS数分别为0.78±0.31、21.60±2.90、10.43±2.56、0.83±0.46、22.44±3.39和23.40±4.24，A治疗组EOS数较A模型组明显减少，差异具有显著性（t=7.08，P＜0.05），B治疗组EOS数与B模型组比较，差异无显著性（t=0.71，P＞0.05）;空白组OVA-sIgE的表达为阴性，其余组为阳性;各组IFN-γ与IL-4比值分别为10.75±3.38、10.38±3.08、3.02±0.69、2.71±0.89、2.52±0.30和5.45±1.41，A治疗组IFN-γ与IL-4比值较A模型组明显升高，差异具有显著性意义(t=5.08 P＜0.05)，B治疗组IFN-γ与IL-4比值与B模型组比较，差异无显著性（t=1.60，P＞0.05）。
　　结论：腹股沟皮下注射免疫治疗小鼠变应性鼻炎效果好，周期短，操作简单，可行性好，是特异性免疫治疗小鼠变应性鼻炎的一种新方法。
　　第二部分：变应性鼻炎特异性免疫治疗前后鼻黏膜microRNA的变化研究。
　　目的：研究microRNA在变应性鼻炎特异性免疫治疗前后表达的变化。
　　方法：雌性BALB/c小鼠，6～8周龄，随机分为对照组、模型组和治疗组。采用卵清蛋白腹腔注射及滴鼻法建立AR小鼠模型，以腹股沟皮下注射法进行SIT，以叠加法进行行为学评分，鼻黏膜嗜酸性粒细胞计数，酶联免疫吸附试验检测血清中特异性OVA-slgE的表达及鼻腔灌洗液中IFN-γ与IL-4的表达。3组小鼠分别用microRNA基因芯片进行初步筛查，筛查治疗组与模型组相比Fold change≥2.0且P＜0.05的microRNA，而后用GeneSpring12.5软件进行靶基因预测并与免疫反应和炎症相关通路中的mRNA取交集。用MEV_4_6_0软件做聚类分析图、Cytoscape_v2.8.2做靶基因网络图。
　　结果：AR小鼠模型及SIT成功。治疗组与模型组相比有9个microRNA表达下调，6个microRNA表达上调。聚类分析可明显看出治疗组和模型组分别聚在两个分支。这15个microRNA的靶基因有5753个，取交集后得到451个与SIT相关性更大的靶基因。从网络图看出，一个microRNA可以调控多个靶基因，一个基因也可以受多个microRNA的调控，它们相互作用可能参与了SIT的机制。
　　结论：鼻黏膜microRNA的表达在AR的SIT前后发生了变化，microRNA可能参与了AR的SIT过程;通过生物信息学方法缩小了microRNA靶基因的查找范围，有利于研究AR在SIT后变化的microRNA对其相关靶基因表达的影响，为AR的发病和SIT机制的认识提供依据。

目录

声明

摘要

第一部分 腹股沟皮下注射法免疫治疗小鼠变应性鼻炎的实验研究

引言

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分 变应性鼻炎特异性免疫治疗前后鼻黏膜microRNA的变化研究

引言

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述 microRNA在调节变应性疾病Th1／Th2平衡中作用的研究进展

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