25(OH)D水平对哮喘小鼠YKL-40、气道炎症的影响以及日照对25(OH)D的影响

摘要

一、维生素D干预后血清25(OH)D水平变化对哮喘小鼠YKL-40、气道炎症等的影响
　　目的：观察不同剂量维生素D对哮喘小鼠血清25(OH)D水平的影响，以及对血IgE、YKL-40浓度和支气管肺泡灌洗液（BALF）细胞计数、YKL-40浓度以及肺组织病理变化的影响，探讨维生素 D补充在哮喘小鼠模型中的作用和机制，以及发挥作用适宜的25(OH)D水平，了解YKL-40在哮喘中的作用。
　　方法：选用健康雌性BALB/c小鼠60只，4～5周龄，随机分成6组，每组10只：正常对照组A组、哮喘对照组B组、哮喘+VD1000IU/kgC组、哮喘+VD2000IU/kg组D组、哮喘+VD3000IU/kg组E组、哮喘+VD4000IU/kg组F组。以卵清蛋白（OVA）致敏和激发的方法建立哮喘模型，于致敏前一周开始以灌胃的方式给小鼠补充维生素D，A组和B组以生理盐水（NS）作为对照，其余四组补充不同剂量维生素D，直至实验结束。ELISA法检测小鼠血清25(OH)D、血清IgE、血清及支气管肺泡灌洗液（BALF）YKL-40浓度，Wright-GMS染色法计数BALF嗜酸性粒细胞（EOS）比例，HE染色肺组织切片。
　　结果：1）血清25(OH)D水平：A组（65.69±2.47）nmol/L、B组（46.11±3.87） nmol/L、C组（85.27±3.26）nmol/L、D组（103.02±4.55）nmol/L、E组（122.45±6.31）nmol/L、F组（137.46±2.89）nmol/L，随着补充量的升高，浓度逐渐升高，B组低于A组，各组之间比较均有统计学差异（P＜0.05）。
　　2）BALF及血清YKL-40浓度：除A组外，灌洗液、血清YKL-40浓度均以D组最低，有统计学差异（P＜0.05）；F组明显高于B组（P＜0.05），差异有统计学意义；C组和E组比较无统计学差异（P＞0.05）。灌洗液和血清YKL-40浓度进行组内比较，C组和D组无统计学差异（P＞0.05），其余各组血清YKL-40浓度均低于灌洗液。
　　3）IgE浓度：在各哮喘组中，D组[（5.02±0.19）ng/mL]浓度最低，与其余各组包括正常对照组[（4.05±0.17）ng/mL]比较均有统计学差异（P＜0.05），C组[（5.70±0.27）ng/mL]和 E组[（5.79±0.24）ng/mL]、B组[（6.35±0.33）ng/mL]和 F组[（6.43±0.40）ng/mL]经比较差别无意义（P＞0.05）。
　　4）细胞计数和EOS(％)：D组细胞计数及EOS%明显低于其余各哮喘组（P＜0.05），差异有统计学意义；F组细胞计数及EOS%明显高于B组（P＜0.05），差异有统计学意义；C组和E组比较无统计学差异（P＞0.05）。
　　5）肺组织病理：A组小鼠管腔正常，未见明显炎症细胞。B组及F组的支气管黏膜皱襞明显增多，周围可见大量炎症细胞浸润，平滑肌和基底膜增厚，管腔狭窄，管腔内可见大量炎性分泌物，其中F组炎症细胞更明显。C组和E组的支气管出现轻度的痉挛收缩，上皮细胞及平滑肌轻度增生，基底膜稍增厚，支气管周围可见少量炎症细胞浸润，管腔内分泌物较少。D组支气管收缩不明显，上皮细胞和平滑肌增生亦不明显，管壁未见明显增厚，周围炎症细胞少，与A组比较略显增多。
　　6）灌洗液YKL-40与EOS%水平正相关（r=0.910，P＜0.01），灌洗液YKL-40与血清IgE呈正相关（r=0.834，P＜0.01），有统计学意义。
　　结论：1）哮喘组小鼠血清25(OH)D水平低于正常对照组，随着维生素D补充的增加，血清25(OH)D水平可增高。
　　2）YKL-40在哮喘的发病机制中可能起促进作用，YKL-40的水平可一定程度上反应哮喘的严重程度，且和IgE、EOS%水平正相关。
　　3）维生素 D的补充对哮喘小鼠可产生双重作用，适量的维生素 D补充（2000IU/kg）可改善小鼠肺部炎症，减少 YKL-40、IgE等的分泌，减轻嗜酸性粒细胞浸润，但过量则会加重炎症反应。
　　4）在哮喘小鼠中，对免疫系统发挥作用适宜的血清25(OH)D水平可能在100nmol/L左右，若超过120-130nmol/L，可能会进一步加重气道炎症。
　　5）维生素D可能直接或间接影响YKL-40分泌，YKL-40也可能影响维生素D的吸收及作用。
　　二、不同日照时间对小鼠25(OH)D水平的影响
　　目的：了解小鼠基础血清25(OH)D水平，观察不同日照时间对25(OH)D的影响，探讨维生素D不足的可能原因。
　　方法：选用健康雌性BALB/c小鼠24只，4～5周龄，随机分成4组，每组6只： A组(正常对照组)、B组（日光照射＜0.5h）、C组（0.5h＜日光照射＜1h）、D组（日光照射＞1h），各组生长环境及饮食均无差异，将小鼠直接充分暴露于秋季太阳光照下相应时间，持续6周。ELISA法检测小鼠血清25（OH）D浓度。
　　结果：各组小鼠的血清25(OH)D浓度为A组（65.37±2.80）nmol/L、B组（65.40±2.84）nmol/L、C组（67.59±1.93）nmol/L、D组（79.02±1.74）nmol/L，D组与其它三组之间差异均有统计学意义（P＜0.01），A、B、C组两两比较后差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　结论：1）目前维生素D缺乏普遍存在，且与哮喘的发病密切相关。
　　2）关于维生素D的补充剂量及日照量需进一步研究。

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引言

第一部分 维生素D干预后血清25（OH）D水平变化对哮喘小鼠YKL-40、气道炎症等的影响

材料与方法

1. 材料

2. 方法

3. 统计学处理

结果

1. 小鼠哮喘模型

2. 血清25-(OH)D水平

3. BALF、血清YKL-40浓度

4. 血清IgE测定

5. BALF细胞计数及嗜酸性粒细胞比例

6. 小鼠肺组织病理切片

7. 灌洗液YKL-40与EOS%及血清IgE相关性分析

讨论

结论

第二部分 不同日照时间对小鼠血清25（OH） D浓度的影响

材料与方法

1. 材料

2. 方法

3. 统计学处理

结果

1. 血清25（OH）D水平

讨论

结论

参考文献

综述:常见营养素在儿童过敏性疾病中的作用

中英文对照缩略词表

附录

攻读学位期间公开发表的论文

致谢