顺铂通过激活自噬信号通路抑制乳腺癌细胞生长的机制研究

摘要

目的：自噬（Autophagy）被称为Ⅱ型细胞程序性死亡（programmed cell death，PCD）。化疗是乳腺癌的主要治疗手段之一，然而自噬是否参与其中，目前尚不完全清楚。本研究拟探讨化疗药物是否能通过自噬途径抑制乳腺癌细胞的生长。
　　方法：1.表阿霉素（EPI）、甲氨蝶呤（MTX）、环磷酰胺（CTX）、顺铂（DDP）处理乳腺癌细胞后，检测其增殖能力、细胞周期、自噬相关基因mRNA的表达。
　　2.建立稳定表达DsRed-LC3细胞株，分别用表阿霉素（EPI）、甲氨蝶呤（MTX），环磷酰胺（CTX）、顺铂（DDP）处理，检测自噬小体的形成。
　　3.通过自噬抑制剂（3-methyladenine，3-MA）阻断自噬通路，再用表阿霉素（EPI）、甲氨蝶呤（MTX）、环磷酰胺（CTX）、顺铂（DDP）处理乳腺癌细胞，检测其增殖能力。
　　4.分别用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）、流式细胞术、实时荧光定量PCR、荧光显微镜检测乳腺癌细胞的增殖能力、细胞周期、自噬基因 mRNA的表达水平、自噬体形成。
　　结果:
　　1.表阿霉素，甲氨蝶呤，环磷酰胺和顺铂抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-453细胞增殖能力，并呈剂量和时间依赖效应。
　　2.表阿霉素，甲氨蝶呤，环磷酰胺和顺铂中，仅顺铂可以诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-453发生自噬。
　　3.自噬抑制剂（3-methyladenine，3-MA）处理后，可削弱顺铂对乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-453抑制增殖的能力，而对表阿霉素，甲氨蝶呤和环磷酰胺的抑生长作用无明显影响。
　　4.顺铂诱导乳腺癌细胞发生G2/M细胞周期阻滞。自噬抑制剂（3-methyladenine，3-MA）不能削弱化疗药物对细胞周期的影响。
　　5.顺铂可以上调自噬相关基因mRNA的表达，包括AMBRA1，ATG3，ATG4C，ATG4D，ATG5,，ATG7，ATG13，ATG14，ATG16L2,，Beclin1,，DRAM1，GABARAP，GABARAPL1，GABARAPL2，HDAC6，IRGM，MAP1LC3B和 ULK1。
　　结论：本研究证实表阿霉素，甲氨蝶呤，环磷酰胺和顺铂对乳腺癌细胞的增殖有抑制作用，并呈时间与剂量依赖性；其中只有顺铂可以诱导乳腺癌细胞自噬。顺铂通过上调了自噬相关基因的表达，诱导乳腺癌细胞自噬，进而导致G2/M期阻滞，从而抑制细胞的增殖。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

引言

材料与方法

1 材料

2 方法

3 统计方法

结果

一、表阿霉素，甲氨蝶呤，环磷酰胺和顺铂对乳腺癌细胞生长的抑制作用

二、DsRed-LC3报告基因显示顺铂诱可以导致乳腺癌细胞自噬

三、顺铂通过自噬依赖性抑制乳腺癌细胞

四、顺铂诱导乳腺癌细胞发生G2/M细胞周期阻滞

五、顺铂上调自噬相关基因的表达

讨论

结论

参考文献

综述: 自噬在肿瘤形成和进展中的作用

中英文对照缩略词表

攻读学位期间公开发表的论文

致谢