利用APC点突变开发可用于ctDNA稀有突变检测的方法研究

摘要

目的：利用APC突变开发可用于ctDNA稀有突变检测的方法。
　　方法：以APC基因为目的基因进行研究，APC基因是cDNA上4012位的一个热点突变（C→T），这是一个特殊的点突变(CTGCAG→CTGTAG),突变后产生一个终止密码子，同时CTGACG是限制性内切酶PstI的识别位点。利用PCR、蓝白筛选和限制性内切酶相结合的方法建立一种高敏感性和无假阳性的突变点检测方法。在此基础上同时探究出一种的新型检测方法-基因型转换。
　　结果：研究得到的突变检测方法敏感性高，且无假阳性，经Sanger’s测序和二代测序验证均为可靠结果，可用于ctDNA的稀有突变检测。
　　结论：经APC点突变成功建立的高敏感性和无假阳性的突变点检测方法可用于ctDNA稀有突变检测。

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研究背景

设备与材料

1.主要仪器

2.主要试剂

3.相关生物信息学软件及网站

4.主要实验试剂的配置

第一部分 PCR偶联限制性内切酶消化、蓝白斑筛选的无假阳性突变点检测方法的建立

前言

实验方法及过程

1 APC野生型和突变型质粒的构建

2 PCR偶联限制性内切酶消化不同比例样本

3 PCR耦联限制性内切酶消化

4 测序

5 蓝白筛选

实验结果

1 成功构建APC野生型和突变型质粒

2 PCR偶联限制性内切酶消化电泳图

3 PCR偶联限制性内切酶消化产物测序图

4 蓝白筛选

讨论

第二部分 一种变换核酸基因型方法的探究

前言

实验方法及过程

1 无引物基因型转换实验

2 有引物基因型转换实验

3 高通量测序

实验结果

1 无引物基因型转换实验结果

2 有引物基因型转换实验结果

3 高通量测序结果

讨论

结论

参考文献

综述肿瘤的早期诊断技术的现状和展望

攻读硕士学位期间发表的论文、科研成果

中英文缩略词表

致谢