绿色荧光蛋白免疫缺陷鼠近交系建立及在脑肿瘤移植模型中的应用

摘要

第一部分：绿色荧光蛋白免疫缺陷小鼠近交系的建立及鉴定
　　目的：培育表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因的近交系免疫缺陷动物，旨在为建立稳定表达EGFP的脑肿瘤原位移植模型奠定基础。
　　方法：通过杂交-回交的方法将EGFP基因导入BALB/c背景裸小鼠及NOD/SCID小鼠，并通过表型及基因型分步筛选子代，繁育新的近交品系。以 PCR、生化位点及皮肤移植法对免疫缺陷动物进行遗传学检测。通过流式细胞术分析模型动物的免疫学特性。
　　结果：荧光裸鼠在杂交-回交第10代后，14个生化位点皆为纯合型，T淋巴细胞比例低下（小于外周血淋巴细胞总数的0.3％），交替植皮成功率是100%，表明已达到EGFP基因同源导入建立近交系的标准，在荧光激发下全身均可见到明亮的绿色荧光。表达绿色荧光蛋白的NOD/SCID小鼠T、B淋巴细胞比例皆低下，且其在荧光激发下全身（除外毛发）也可见到明亮的绿色荧光。
　　结论：成功地建立了一个既与亲本C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)－样稳定表达EGFP，又与免疫缺陷小鼠（BALB/c背景或NOD/SCID背景）一样具有免疫功能缺陷的近交新品系。利用同源导入法建立的新品系稳定表达EGFP的模型小鼠，为人胶质瘤原位移植示踪研究胶质瘤及其肿瘤微环境奠定坚实基础。
　　第二部分：EGFP免疫缺陷近交系小鼠不同脑区荧光表达特性分析及其在脑肿瘤移植模型中的应用
　　目的：分析近交系增强型绿色荧光（EGFP）裸小鼠脑组织不同区域 EGFP的表达情况，旨在建立稳定表达EGFP示踪的脑肿瘤原位移植模型。
　　方法：以免疫荧光法检测所建立模型鼠不同区域脑组织及神经干细胞EGFP表达情况。BALB/c荧光裸鼠颅内接种U87-红色荧光蛋白（RFP）细胞并建立原位胶质瘤模型。乳腺癌脑转移瘤组织块接种于NOD/SCID/EGFP小鼠，建立原位移植瘤模型。
　　结果：荧光裸鼠在荧光激发下全身均可见到明亮的绿色荧光,各脏器组织细胞(红细胞除外)均表达EGFP,但表达强度有差异,脑组织中EGFP表达，脑组织中E GFP呈中度表达，显著高于肝组织（肝组织中EGFP呈低度表达），且连续传代胎脑神经干细胞7代其荧光表达强度未见明显降低。近交系荧光裸鼠皮下接种 U87细胞致瘤率为5/5，原位移植U87-RFP胶质瘤细胞株的颅内移植瘤组织中可清晰显示肿瘤组织中存在的红色、绿色荧光细胞。乳腺癌脑转移瘤临床标本组织块原位接种NOD/SCID/EGFP小鼠，移植瘤组织中可见组织细胞呈巢状分布的特点在该模型中很好地保留。
　　结论：利用同源导入法建立的近交系免疫缺陷鼠稳定表达EGFP，可为人胶质瘤原位移植示踪研究胶质瘤及其肿瘤微环境奠定坚实基础。NOD/SCID/EGFP小鼠能够更好地保留临床肿瘤标本的特性，在肿瘤微环境相关研究中具有潜在的应用价值。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

序言

第一部分：绿色荧光蛋白免疫缺陷小鼠近交系的建立及鉴定

引言

材料和方法

实验结果

讨论

参考文献

第二部分：EGFP免疫缺陷近交系小鼠不同脑区荧光表达特性分析及其在脑肿瘤移植模型中的应用

引言

材料和方法

结果与分析

讨论

参考文献

研究小结

综述: 免疫功能缺陷动物品系在肿瘤研究中的应用

中英文对照缩略词表

攻读硕士学位期间公开发表的论文

攻读硕士学位期间所获得的奖励

致谢