孕期高糖饮食对成年子代雄性大鼠肠系膜动脉大电导钙激活钾通道的影响及相关机制研究

摘要

目的：探讨孕期母体高糖饮食对子代成年雄性大鼠肠系膜动脉大电导钙激活钾通道（BKCa）的影响及其相关机制研究。
　　方法：4月龄SD雌雄大鼠按照1：2进行配种，发现阴栓时视为孕期第一天。将孕鼠随机分为高糖组和对照组，每组20只。高糖组孕鼠自孕期第一天起就给予20％的蔗糖水和正常饲料直至子代出生，而对照组给予自来水和正常饲料。于孕期第21天取胎鼠和出生后的4月龄成年大鼠用于以后所有实验。胎鼠实验包括检测胎血血糖、胎重等；成年子代雄性大鼠实验主要是利用DM T及膜片钳技术分别检测两组血管张力和大电导钙激活钾通道电流的变化及BKCa通道开放，同时采用实时定量PCR和Western blot技术检测大电导钙激活钾通道的表达水平。最后，通过DHE、蛋白表达和敷育相应抑制剂探讨检测引起血管张力和电流改变的相关机制。
　　结果：（1）与对照组相比，高糖组胎鼠体重明显增加，母体、胎鼠和成年子代雄性大鼠的血糖水平均升高。（2）孕期高糖饮食对成年子代基础状态下血压无明显影响，但动脉给予PE刺激后，高糖成年子代的平均动脉压（mean arterial pressure, MAP）明显升高；高糖组大鼠肠系膜动脉血管对去氧肾上腺素（phenylephrine, PE）的收缩反应明显增强，而血管平滑肌细胞全细胞基础钾电流和BK Ca通道开放明显低于对照组；预先敷育BKCa特异性阻断剂iberiotoxin（IBTX）对PE（10-4，最大浓度）上升幅度比对照组明显，IBTX对两组的全细胞钾电流均有明显的抑制作用，但在高糖组的抑制作用不如对照组明显；高糖组肠系膜血管平滑肌上BK Ca-α和-β1的mRN A及蛋白表达明显下调。（3）与对照组相比，DHE结果发现高糖组大鼠肠系膜动脉血管上超氧阴离子（O2-）明显增多；同时，NOX4的蛋白表达增强，SOD1表达下降，而NOX1和NOX2没有明显改变。（4）预先敷育apocynin后高糖组大鼠肠系膜动脉血管对 PE(最大浓度)的张力反应及全细胞电流、BKCa通道开放变化与正常组相比变化更明显，同样敷育apocynin和IBTX，发现[（HS+apocynin+IBTX）-（HS+apocynin）] VS[（HS+IBTX）-HS]具有统计学差异，而在对照组无明显变化。（5）在高糖组， p-AKT/AK T显著降低，而FBXO32的mRN A水平显著升高。
　　结论：孕期高糖饮食通过上调成年子代雄性大鼠肠系膜血管内 N O X4的蛋白表达，降低 SOD1的蛋白表达使氧化应激水平增强，体内 ROS代谢紊乱，并使AKT/FBXO32相关通路受损，导致BKCa通道失调，从而影响血管张力、电流密度及分子表达，导致高糖子代患高血压及相关心血管疾病的风险增大。

目录

声明

引言

参考文献

第一部分 材料与方法

1. 1实验动物

1. 2 主要试剂

1. 4常用缓冲液

1. 5研究方法

1. 6 统计学分析

第二部分 实验结果

2. 1 孕期高糖饮食对子代体重和血糖的影响

2. 2 孕期高糖饮食对成年子代雄性大鼠平均动脉压的影响

2.2 孕期高糖饮食对成年子代雄性大鼠血管BKCa通道的影响

2.3 成年大鼠肠系膜动脉上超氧阴离子（O2-）的表达以及相关蛋白表白

2.4 氧化应激对成年子代雄性大鼠血管BKCa通道的影响

第三部分 讨 论

BKCa调控血管张力

ROS抑制BKCa的活性

ROS调控BKCa的潜在机制

结论

参考文献

综述：氧化应激与心血管疾病研究进展

英文缩略词表

攻读硕士研究生期间发表论文及参与的研究项目

致谢