血液系统Prkαcα基因敲除模型的建立及其主要影响因素的探讨

摘要

目的：
　　通过移植小鼠胎肝细胞（FLCs），建立血液系统 Prkαcα（Protein kinase, c AMP dependent, catalytic, alpha）基因敲除小鼠模型并探讨影响该模型建立的主要因素。
　　方法：
　　将 Prkαcα基因敲除的杂合子小鼠杂交，获得适龄胎鼠，分离胎肝制成单个肝细胞悬液，一对一回输给经致死剂量辐照4h后的野生型受体小鼠。聚合酶链式反应( PCR)鉴定供体基因型。 Western blot检测重建后血液系统 Prkαcα蛋白表达。实验分为，受体小鼠移植前辐照剂量：8.5Gy、9.5Gy、10.5Gy；供体胎龄：13.5、15.5、17.5、19.5天；胎肝细胞回输方式：经眼球后静脉窦回输、经尾静脉回输。观察并统计30天内小鼠的存活情况。
　　结果：
　　使用辐照剂量分别为8.5Gy、9.5Gy、10.5Gy的移植存活率依次为（100％、91%、78%），差异具有显著统计学意义（P＜0.05）；接受8.5Gy的辐照剂量及 Prkαcα-/-FLC建立的小鼠模型血液系统中仍有少量 Prkαcα蛋白表达，接受9.5Gy、10.5Gy的辐照剂量及 Prkαcα-/-FLC建立的小鼠模型血液系统无 Prkαcα蛋白表达，差异具有统计学意义（P＜0.05）。在辐照剂量均为9.5Gy的条件下，使用胎龄为（13.5天、15.5天、17.5天、19.5天）来源的胎肝细胞进行移植，存活率依次为（89%、91%、88%、89%），差异无显著统计学意义（P＞0.05）。经眼球后静脉窦回输方式获得的移植成功率（91%）与经尾静脉回输方式获得的移植成功率（80%）相比较，差异有明显统计学意义（P＜0.05）。
　　结论：
　　使用9.5Gy的辐照剂量，胎龄为13.5天、15.5天、17.5天、19.5天胎鼠肝细胞，一对一经眼球后静脉窦回输，进行胎肝细胞移植，可简单有效得建立血液系统 Prkαcα基因敲除小鼠模型。

目录

声明

引言

参考文献

1. 材料与方法

1.1材料

1.1.1主要试剂

1.1.2 主要仪器和设备

1.1.3 实验动物

1.2 实验方法

1.2.1 胎肝细胞的准备

1.2.2 受体小鼠的准备

1.2.3 血液系统 Prkαcα 基因敲除模型的建立

1.2.4 Prkαcα 基因型的鉴定

1.2.5 血液系统 Prkαcα 蛋白的检测。

1.2.6 比较辐照剂量对血液系统Prkαcα基因敲除小鼠模型建立的影响

1.2.7 比较供体的胎龄对血液系统Prkαcα基因敲除小鼠模型建立的影响

1.2.8 比较眼球后静脉窦与尾静脉回输胎肝细胞方式对血液系统 Prkαcα 基因敲除小鼠模型建立的影响

1.2.9 移植后小鼠的管理

1.3 统计学分析

结果

2.1基因鉴定结果

2.2辐照剂量对模型建立的影响

2.3供体胎龄对模型建立的影响

2.4比较眼球后静脉窦与尾静脉回输胎肝细胞对移植成功率的影响

讨论

结论

参考文献

综述:生理病理条件下血小板膜蛋白脱落的调节机制研究进展

缩略词

攻读学位期间公开发表的文章

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