原癌基因CT45A1促进肿瘤转移基因SULF2在乳腺癌细胞中异常高表达的分子调控机制研究

摘要

乳腺癌发病率居女性恶性肿瘤发病率之首，虽然早期可以通过外科手术及联合放疗化疗等治疗手段，使乳腺癌的五年生存率可达70％以上。但许多的乳腺癌患者在确诊时便已发生转移，外科手术已无能为力，更有甚者，转移性乳腺癌还常常耐放疗化疗，目前没有很好的治疗方法。并且乳腺癌在治疗后也易出现复发和转移，目前我国每年乳腺癌死亡人数高达7万人。因此，乳腺癌仍然是造成女性死亡主要恶性肿瘤之一。
　　肿瘤转移是导致乳腺癌病人死亡的最重要原因，研究显示，90%病人死亡是由于肿瘤转移所致。乳腺癌为何在一部分病人易发生转移的机制目前尚不清楚，现有抗乳腺癌转移药物的疗效都不佳。因此，阐明乳腺癌转移的机制已经成为全球癌症研究亟待解决的科学难题，也是目前转移性乳腺癌的早期诊断和防治研究的科学前沿。乳腺癌的转移机制非常复杂，涉及多个基因多个信号通路。到底哪些癌基因和促癌基因乳腺癌转移中起关键作用，迄今知之甚少。
　　CT45A1是癌睾抗原CT45家族的成员之一，在胚胎发育过程中高表达，促进干细胞增殖，而在人出生后该基因仅在男性睾丸的精原（干）细胞中表达，在其他各种组织中都不表达。最近我们报道了CT45家族成员CT45A1作为新的原癌基因能诱导多种癌基因异常高表达，包括肿瘤转移性基因SULF2（硫酸酯酶II），促进乳腺癌转移（ShangB, et al.Cell DeathDis2014）。但有关SULF2基因在肿瘤差异高表达的调控机制不明，CT45A1如何促进SULF2基因异常高表达的机制在国内外迄今尚未见报道。
　　鉴于CT45A1是定位于细胞核的核蛋白，且能与DNA结合，我们提出科学假设：CT45A1可能作为基因转录激活物，通过与SUFL2基因启动子序列结合，增强其启动子活性，并通过与转录因子相互作用，促进SULF2基因异常高表达。为了证明这一设想，我们采用了Luc ifera se基因报告系统、核酸-蛋白结合实验、免疫共沉淀实验和特异性抑制剂实验等研究策略和方法。通过一系列研究，我们发现：（1）CT45A1显著提高乳腺癌细胞中SULF2蛋白表达水平。（2）Luciferase基因报告系统揭示，CT45A1能明显增强SULF2启动子活性，从而促进SULF2基因转录。（3）DNA-蛋白质结合实验显示，CT45A1能够结合于SULF2基因启动子片段（-107bp至-145bp）,该结合片段含有转录因子Sp1的核心结合位点ATGCCCCCTGG。（4）免疫共沉淀证明，CT45 A1能够与Sp1相互作用，增强SULF2基因转录，这一作用能够被Sp1特异性抑制剂阻断，提示CT45A1能够作为转录因子Sp1激活物促进SULF2的高表达。
　　综上所述，我们发现CT45A1能够通过结合到SULF2启动子上，并与转录因子Sp1相互作用，作为转录因子Sp1的激活物，从而促进转移性基因SULF2在乳腺癌细胞中异常高表达。揭示了CT45A1激活乳腺癌中转移基因SULF2的异常高表达的机制。因此，本研究对阐明乳腺癌转移机制有重要的意义，为乳腺癌转移机制研究提供了新视角，也为抗乳腺癌转移新药研发提供了新思路和靶标。

目录

声明

前言

一、乳腺癌转移与乳腺癌病人死亡

二、乳腺癌转移机制研究进展

三、S ULF 2的异常高表达与乳腺癌瘤转移密切相关

四、CT 45A1作为原癌基因促进乳腺癌转移

五、拟解决的科学问题和研究策略

材料与方法

一、材料与试剂

二、方法

结果

一、CT 45A1促进乳腺癌细胞中肿瘤转移基因SULF 2异常高表达

二、DNA去甲基化促进CT 45A1和S ULF 2基因高表达

三、CT 45A1促进S ULF 2转录的分子机制研究

讨论

一、S ULF 2与乳腺癌转移

二、S ULF 2异常高表达的调控机制

结论

参考文献

综述:癌睾抗原基因与上皮间质转化及肿瘤干细胞发生

攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文

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致谢