消退素D1对肺泡上皮细胞损伤修复、EMT及支气管上皮细胞功能的影响及机制研究

摘要

肺部急慢性炎症疾病如IPF，ARDS均存在大量肺泡上皮细胞屏障损伤及其细胞大量凋亡坏死。消退素是在炎症反应中合成的多不饱和脂肪酸衍生物,能发挥抗炎促进炎症及时消退的独特作用。另外消退素D1能保护LPS诱导的急性肺损伤，但其中机制并未完全清楚。本实验以研究消退素D1对肺泡上皮细胞损伤修复、凋亡和支气管上皮细胞功能的影响为中心，探讨消退素D1促肺部炎症消退的具体机制。实验分为三个部分：
　　第一部分：消退素D1对人原代肺泡上皮细胞损伤修复、增殖和凋亡的影响及机制
　　目的：消退素D1是在炎症反应消退阶段合成的，并具有强效的抗炎作用和促进肺部疾病炎症消退。本研究旨在探讨消退素D1对人原代Ⅱ型肺泡上皮细胞修复及凋亡的影响及机制。
　　方法：分离、纯化得到人Ⅱ型肺泡上皮细胞，采用划痕损伤实验来测定消退素D1对于肺泡上皮细胞损伤修复的影响；采用细胞增殖试剂盒测定细胞增殖；采用流式细胞仪检测细胞凋亡；采用实时定量 PCR测定基因表达；并采用Western-blot测定蛋白表达。
　　结果：消退素D1能通过消退素受体及激活PI3K-Akt信号通路促进人原代肺泡II型上皮细胞损伤后修复以及增殖，并抑制Fas-ligand所致的原代Ⅱ型肺泡上皮细胞的凋亡。
　　结论：本实验结果提示消退素D1促进肺部炎症消退作用与其促进Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤修复增殖，并抑制Ⅱ型肺泡上皮细胞的凋亡，从而促进肺泡上皮屏障修复密切相关。因此本实验为消退素D1抗炎促消退作用提供新证据。
　　第二部分：消退素D1抑制TGF-β诱导的人肺泡上皮细胞发生上皮间质转化（EMT）
　　目的：肺泡上皮细胞-间质转化是完全分化的上皮细胞经历细胞表型改变，转化成完全分化的间质细胞的过程。本研究旨在探讨消退素D1对TGF-β诱导的人肺泡上皮细胞发生上皮间质转化（EMT）的影响及机制。方法：分离、纯化得到人Ⅱ型肺泡上皮细胞，采用TGF-β诱导的人肺泡上皮细胞EMT的过程；采用实时定量 PCR测定基因表达；并采用Western-blot测定蛋白表达。
　　结果：消退素D1能抑制TGF-β诱导的人肺泡上皮细胞发生上皮间质转化（EMT），并通过激活消退素受体起作用。
　　结论：本实验结果提示消退素D1促进IPF或ARDS肺部炎症消退与其抑制TGF-β诱导的人肺泡上皮细胞发生EMT密切相关。因此本实验为消退素D1抗炎促消退作用提供新证据。
　　第三部分：消退素D1抑制人支气管上皮细胞（HBECs）环氧合酶-2(COX-2)表达
　　目的：本实验旨在探讨消退素D1素对人支气管上皮细胞（HBECs）环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。
　　方法：应用不同浓度（0.1、1、10μg/ml）的内毒素（LPS）刺激HBECs9 h，或者用1μg/ml LPS分别刺激HBECs不同时点（3h、6h、9h）后，测定HBECs的COX-2 mRNA表达和细胞上清液前列腺素E2（PGE2）水平。应用不同浓度(0、100、400nmol/mL)的消退素D1作用于经过LPS（1μg/ml）刺激培养9 h的HBECs，采用酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液PGE2蛋白的水平,同时分别应用RT–PCR和Western-blotting分别检测HBECs COX-2 mRNA及蛋白的表达。结果：内毒素刺激培养条件下HBECs的COX-2 mRNA表达及其上清液PGE2水平增加，并呈时间剂量依赖关系。
　　结果：消退素D1能抑制LPS刺激培养HBECs COX-2蛋白、mRNA的表达及上清液PGE2的水平，并呈一定剂量依赖性的。
　　结论：消退素D1能抑制内毒素诱导的HBECs COX-2表达及上清液PGE2的水平。

目录

声明

序言

参考文献

第一部分：消退素D1对人原代肺泡上皮细胞损伤修复、增殖和凋亡的影响及机制

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分：消退素D1抑制TGF-β诱导的人肺泡上皮细胞发生上皮间质转化（EMT）

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三部分：消退素D1抑制人支气管上皮细胞（HBECs）环氧合酶-2(COX-2)表达

方法和材料

结果

讨论

参考文献

结论

综述: 消退素的抗炎机制及其在肺部疾病中的应用

中英文缩略词表

攻读学位期间公开发表的论文

致谢